T7 ARCA加帽加尾 mRNA合成试剂盒

描述：大多数真核 mRNA 的高效翻译需要在 5’末端有一 个 7-甲基鸟苷帽结构、3’末端有一个 Poly(A)尾。T7 ARCA 加帽加尾 RNA 合成试剂盒可以快速的体外合成带帽带尾 的 mRNA。T7 RNA 聚合酶通过转录，将抗-反向帽类似 物（ARCA）加到 mRNA 上。经 DNase I 短暂温育可以 去除模板 DNA，并在 Poly(A)聚合酶的作用下，为加帽的 mRNA 加 Poly(A)尾。利用该试剂盒得到的 RNA 适用于 多种下游应用，如 RNA 结构和功能研究、核酸酶生物化 学研究、RNase 保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。 T7 RNA 聚合酶识别 T7 promoter（TTCTAATACGA CTCACTATAGG）以方框中 G 碱基为起点开始转录，该 试剂盒可以从少量样本得到高效转录，单次反应可获 得>30 μg 的 mRNA 产物，转录长度可达 4000nt 以上。 转录产物 80%以上含有 7-甲基鸟苷帽结构、Poly(A)尾长 度>80nt。 原理： 组分： 名称 10T 50T 5×ARCA/NTP mix 40μL 200μL 5×T7 RNA Pol Buffer 40μL 200μL T7 ARCA Enzyme Mix 40μL 200μL 10×EPAP Reaction Buffer 1mL 1mL Poly(A) Polymerase 50μL 250μL RNase Free DNase I 20μL 100μL RNase Free H2O 1mL 1mL 保存： -20℃可保存 2 年，避免反复冻融。 操作步骤： （1）按以下组分配制转录反应液 2×ARCA/NTP Mix 4 μl 5×T7 RNA Pol Buffer 4 μl DNA（RNase Free） 0.1~1 μg T7 ARCA Enzyme Mix 4 μl RNase Free H2O To 20 μl （2）37℃反应 1~2h，转录带帽 RNA 产量在 20~30μg。 （3）转录完毕后，向上述反应液中加入 2μL RNase Free DNase I，37℃孵育 15min 去除 DNA 模板。 （4）进行加尾反应 上述转录产物 20 μl 10×EPAP Reaction Buffer 3 μl Poly(A) Polymerase 5 μl RNase Free H2O 22 μl 放置 37℃反应 30~60min 完成加 Poly(A)尾。 （5）反应完毕后，可电泳检测或放置-80℃保存。或选用 5min RNA Purification Kit 进行转录 RNA 的纯化，以去除盐、NTP、蛋白等。

大多数真核mRNA的高效翻译需要在5’末端有一个7-甲基鸟苷帽结构、3’末端有一个Poly(A)尾。T7 ARCA加帽加尾RNA合成试剂盒可以快速的体外合成带帽带尾的mRNA。T7 RNA聚合酶通过转录，将抗-反向帽类似物（ARCA）加到mRNA上。经DNase I短暂温育可以去除模板DNA，并在Poly(A)聚合酶的作用下，为加帽的mRNA加Poly(A)尾。利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用，如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义RNA及RNAi实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和RNA疫苗等。 T7 RNA聚合酶识别T7 promoter（TTCTAATACGA CTCACTATAGG）以-2位G碱基为起点开始转录，该试剂盒可以从少量样本得到高效转录，单次反应可获得>30 μg的mRNA产物，转录长度可达4000nt以上。转录产物80%以上含有7-甲基鸟苷帽结构、Poly(A)尾长度>80nt。

组份

名称 10T 50T 5×ARCA/NTP mix 40 μl 200 μl 5×T7 RNA Pol Buffer 40 μl 200 μl T7 ARCA Enzyme Mix 40 μl 200 μl 10×EPAP Reaction Buffer 1 ml 1 ml Poly(A) Polymerase 50 μl 250 μl RNase Free DNase I 20 μl 100 μl RNase Free H2O 1 ml 1 ml

原理

储存

-20℃可保存2年，避免反复冻融。

实例

以PCR产物作为模板进行体外转录获得的RNA，应用T7 ARCA加帽加尾mRNA合成试剂盒进行加帽加尾，如图：泳道1为体外转录获得的RNA，泳道2为加帽加尾后产物。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！