TMT

TMT™ ——Amine-reactive Thermo Scientific Tandem Mass Tag™ 

产品定义

TMT™（Tandem Mass Tag™）技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用2种、6种或10种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。

技术原理

TMT™标签由三部分组成：分子量报告子、分子量标准化部分和反应基团，形成2种、6种或10种相对分子质量均等量的异位标签。

TMT™标签结构示意图

TMT™试剂通过反应基团能够高效地标记酶解后的肽段。在一级质谱图中，分子量标准化部分使任何一种TMT™试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中，可剪切臂能够优先断裂以便释放分子量报告子。每个报告子都有各自独特的分子量，并且能够在MS/MS分析中反应出所标记的多肽的样品丰度，根据报告离子的信号强度值可获得样品间相同肽段的定量信息，再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。

TMT™实验流程图（以6标为例）

实验流程

注释：“样品及实验预判”包括蛋白质定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析，对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。

使用仪器

Thermo Scientific Q Exactive

技术优势

■ 可同时对2-10种不同条件样品进行蛋白质差异分析；

■ 适合广泛样品类型：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等；

■ 与凝胶分离的蛋白质定量技术相比，TMT™质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子，如低丰度蛋白质、强酸（碱）性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。

应用领域

■ 疾病标志物筛选

■ 分子机制研究

■ 植物抗逆研究

■ 药物作用靶点研究

■ 特殊功能蛋白质筛选

样品要求

技术参考案例

[1]   Thompson, A, et al. Tandem mass tags: a novel quantification strategy for comparative analysis of complex protein mixtures by MS/MS. Anal Chem. 2003; 75(8):1895-1904.

[2]   Dayon, L, et al. Relative quantification of proteins in human cerebrospinal fluids by MS/MS using 6-plex isobaric tags. Anal Chem. 2008; 80(8):2921-31.

[3]   Zhuang, G, et al. Phosphoproteomic analysis implicates the mTORC2-FoxO1 axis in VEGF signaling and feedback activation of receptor tyrosine kinases. Sci Signal. 2013; 16; 6(271):ra25.