F-DH5α快速转化感受态细胞-克隆与表达-试剂-生物在线
F-DH5α快速转化感受态细胞

F-DH5α快速转化感受态细胞

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产品名称: F-DH5α快速转化感受态细胞

英文名称: F-DH5α

产品编号: HZX17002

产品价格: 0

产品产地: 中国/上海

品牌商标: HZbscience

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

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 F-DH5α快速转化感受态细胞

产品规格: F-DH5α 10×100μl pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoADH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒 DNA 的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证 了插入 DNA 的稳定性;lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于蓝、白斑筛选F-DH5α感受态细胞经特殊工艺制作,无需 42℃热激,37℃孵育步骤,只需冰浴,10min 内完成转化、涂板操作.(一)提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。 (二)F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA(质粒或连接产物) 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,,冰中静置 5 分钟。(三)用 200 μl 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 LB 培养基上,涂均匀,表面无水渍。 (四)将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养至少 15h。 一、F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5 分钟后待菌块融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,,冰中静置 5 分钟。二、42℃水浴热激 45 秒,迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB, 37℃,200 rpm 复苏 10 分钟,涂板 (均匀,表面无水渍)。三、将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养至少 15h。(一)F-DH5α快速转化感受态细胞也可进行热激操作,对于>7 kb 质粒的构建,为了提高转化效率可按以下步 骤操作:F-DH5α感受态细胞从-80℃拿出,插入冰中,5 分钟后,加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀,冰中 静置 20 分钟。42℃水浴热激 45 秒,迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB,37℃,200 rpm 复苏 30 分钟,涂 板。(二)感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存 放会降低转化效率,混入目的 DNA 时应轻柔操作。(三)F-DH5α快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高,若涂卡那霉素或其他抗生素平板, 转化效率下降(因无孵育步骤,卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率,可按热激 转化操作,增加孵育步骤