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植物花色苷测试盒

植物花色苷测试盒

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产品名称: 植物花色苷测试盒

英文名称: Plant Anthocyanins Assay Kit

产品编号: YS46001

产品价格: null

产品产地: 上海

品牌商标: 雅吉

更新时间: null

使用范围: WB, IF, ICC

上海雅吉生物科技有限公司
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 正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
植物花色苷测试盒测定意义:
花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、
茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。
测定原理:
采用 pH 示差法测定花色苷含量,当 pH 为 1.0 时花色苷在 530nm 处有最大吸收峰,而当 pH
为 4.5 时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在 530 处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同
pH 下的 530nm 和 700nm 处的吸光度值。pH 示差法减少了溶液 pH 和溶剂差异的影响,排除了
其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100 mL× 1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20 mL× 1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 20 mL × 1 瓶,4℃保存;
花色苷的提取:
按照烘干样品质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 烘干样品,
加入 1mL 提取液),充分匀浆后转移到 EP 管中,提取液定容至 1 mL,盖紧后 4℃浸提 24 h,
8000 g,常温离心 10 min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上;试剂一和试剂二预热 10min 以上;
2、取 20 µL 上清液和 180 µL 试剂一(相当于稀释 10 倍),静置 15min,分别测定 530nm 和
700nm 处的吸光值,分别记为 A1 和 A2。
3、 取 20 µL 上清液和 180 µL 试剂二(相当于稀释 10 倍),静置 15min,分别测定 530nm
和 700nm 处的吸光值,分别记为 A3 和 A4。
4、 计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注意:如果A1大于1,可以适当加大稀释倍数,保证总体积200 µL不变,如10 µL上清液和
190 µL试剂一(相当于稀释20倍);如果A1小于0.1,可以适当缩小稀释倍数,保证总体积不
变,如100 µL上清液和100 µL试剂一(相当于稀释2倍),使A1保持在0.1~1范围内,可提高
检测灵敏度;同样调整上清液和试剂二体积比例;计算时以实际稀释倍数代入下述公式中。
花色苷含量计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
花色苷含量(µg/g 干重)=[ΔA×V÷(ε×d)×M×F×106
]÷W=16.7×ΔA× F÷W
V:提取液体积,1×10-3
L;ε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104
L / mol /cm;d:比色皿光
径,1cm;M:花色苷的相对分子质量:449.2g/mol;F:稀释倍数;106:1g=106
µg;W:样
本干重:g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
花色苷含量(µg/g 干重)=[ΔA×V÷(ε×d)×M×F×106
]÷W=33.4×ΔA× F÷W
V:提取液体积,1×10-3
L;ε:花色苷的摩尔消光系数,2.69×104
L / mol /cm;d:96 孔板光
径,0.5cm;M:花色苷的相对分子质量:449.2g/mol;F:稀释倍数;106:1g=106
µg;W:
样本干重:g。
注意:最低检测限为 0.2μg /g 干重