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解读外泌体—锐赛生物为您助力高分文章(下)

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文章附图

 

 

 

体经典回顾

 

自2007年首次在外体中发现mRNA和miRNA,外体相关的研究一直备受关注。有数据显示,目前,有关外体的学术论文已超20000篇,主要研究方向有癌症研究、神经科学、干细胞研究、生殖医学等。

其中研究最为热门的当属癌症研究(胰腺癌,前列腺癌等),主要用于肿瘤液体活检,即以患者的体液作为肿瘤活检的样本,捕捉和检测体液中外(Exosome),运用二代测序等技术可快速准确鉴定肿瘤标志物。

肿瘤细胞特异性标志物已逐渐成为肿瘤诊断中必不可少的检测项目。常规的肿瘤标志物筛查可能需要进行组织活检,通过穿刺等方式取得病人活体样本;而液体活检具有速度快、样本容易获取、痛苦/风险小等特点。

 

体文献都发表在哪些杂志?

 

荣登外体文章发表数量前三甲的journal分别是Scientific Reports、PLoS One、Oncotarget,大家对于这三个杂志是不是耳熟能详(⊙﹏⊙)b。。。Scientific Reports以253篇外体文章位列第一,PLoS One 197篇、Oncotarget 174篇。(数据更新至2017年11月15日)

 

领域划分方面,除综合类杂志外,肿瘤类杂志中oncotarget鹤立鸡群、心血管类中Circulation Research发表了较多数量的外体文章、干细胞类中发表较多的是Stem Cell Research & Therapy、STEM CELLS等。


 

经典案例

 

 

以下为外泌体应用相关文献案例解析:

 

肝癌细胞外体microRNA-103通过靶向连接蛋白增加血管通透性并促进转移

 

  

 

背景

关于肿瘤细胞的转移、侵袭能力研究的很多,但很少研究通过调控血管通透性而影响肿瘤转移的机制。

 

实验思路

临床样本-miR103:

不同分型肝癌病人的血清样本

miRNA测序——qPCR验证;复发、转移、分期相关性分析

miRNA-103与转移相关、分期相关

细胞系-miR103:

肝癌高低转移细胞系、正常肝癌细胞、正常内皮细胞、肝癌内皮细胞

Cell、CM、exo中miR-103的表达(qPCR检测)、对内皮细胞通透性的影响(调控miR-103)、血管形成

肝癌细胞分泌的miR-103会增加血管通透性,促进肿瘤细胞对血管的侵袭


肝原位模型:

QGY-7703-miR103、QGY-7703-ctrl细胞肝原位模型、模型鼠血清、血清中外

qPCR检测、血管通透性检测、肿瘤转移检测、肿瘤内血管形成检测、MMP2检测、肿瘤大小检测

肝癌细胞分泌的miR-103会增加血管通透性,促进肿瘤转移

细胞—外体递送miR103:

肝癌高低转移细胞系、正常肝癌细胞的外体、CM及内皮细胞

共孵育,qPCR检测,confocal检测

肝癌细胞分泌的外体中miR-103可以递送给内皮细胞


细胞—miR103靶向调控:

肝癌高低转移细胞系、正常肝癌细胞的外体、CM及内皮细胞

Confocal、WB检测、双荧光素酶检测、迁移、侵袭、qPCR

miR103促使P120、E-cad、β-cat表达降低,促进细胞离散、迁移

 

实验结果——临床样本检测结果

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Higher level of serum miR-103 is associated with higher recurrence rate of HCC

 

实验结果——肝癌细胞系miR103的表达

 

 

 

 

 

 

 

1)The CM from the liver cells or hepatoma cells that were grown in SFM supplemented with 10% exosome-depleted FBS (10%FBS-SFM) was collected and stored at -80°C.

2)提高肿瘤细胞内miR103的表达,相应的,CM和exo里面的miR103含量也相应增加

 

实验结果——体内验证外体miR103功能

 

1)miR103高表达肿瘤鼠血浆外体中miR103高表达,血管通透性增强,血管屏障减弱;

2)肝内转移增多,转移肿瘤结节直径较大;肺脏转移差异不明显;

3) miR103高表达对原发肿瘤大小、血管生成、MMP2的表达没有影响。

 

实验结果:miR103通过外体递送给内皮细胞

 

1)miR103高表达细胞分泌的外体递送到内皮细胞的miR103比较高;

2)外体分泌受到抑制时,内皮细胞中miR103含量也收到抑制;

3)内皮细胞本身miR103表达降低时,外体递送的miR103也受到抑制。

肉皮4.jpg

实验方法:

1)exosomes were incubated with DiIC16 (finalconcentration at 1 μM in PBS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) for 20 min, followed by washing/spin in PBS at 110,000 g for 70 minutes twice to remove the excess DiIC16 dye。

2)Exosomes from QGY-7703 cells that weretransfected with 50 nM FITC-tagged miR-103 were labeled with fluorescent dye DiIC16 (left panel) and then applied to treat HUVECs for 4 hours, following by imaging under a fluorescence microscope.

 

实验结果——miR103调控P120、E-cad、β-cat

1)miR103高表达细胞株分泌的外体会抑制内皮细胞VE、p120、zo-1的表达

2)miR103靶向调控VE、p120、zo-1基因


1)miR103高表达会抑制肝癌细胞中E-CAD、p120的表达,会促进肝癌的迁移;低表达会促进你E-CAD、p120的表达,抑制细胞的迁移

 

体的研究潜力巨大,但目前外体的应用仍然处于初级阶段,体在肿瘤中的研究套路也成了国自然的新宠。锐赛生物设计多个研究方案为您的外体科研助力,期待您来电了解更多详情!

 

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