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索莱宝丨Western Blot整体解决方案

活动品牌:索莱宝|Western Blot | 有效期:2018.08.22-2018.10.31

促销时间:2018.8.21-2018.10.31

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索莱宝丨Western Blot整体解决方案

蛋白电泳 SDS-PAGE原理

SDS是一种阴离子表面活性剂,能打断蛋白质的氢键和疏水键,并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷,掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此,各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率,不再受原有电荷和分子形状的影响,而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDSPAGE)。实验使用过程中,还加入DTT或者巯基乙醇,以打开蛋白间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构。SDSPAGE最常采用垂直板不连续系统(分离胶与浓缩胶)。

一、样品制备

本公司有多种用于样品制备的组织裂解液,每款裂解液会配备一管蛋白酶抑制剂pmsf。本公司还有多种蛋白酶抑制剂供您使用。

·实验试剂

产品货号 产品名称

R0010 高效RIPA_

R0020 普通RIPA

R0030 非变性组织细胞裂解液

A8260 Aprotinin 蛋白酶抑制剂(抑肽酶)

P8100 Pepstatin A 胃蛋白酶抑制剂

P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制剂混合物

T8031 Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制剂

P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制剂混合物

539133 Protease Inhibitor Cocktail Set VI

539134 Protease Inhibitor Cocktail Set III

PC0030 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒

PC0010 Bradford蛋白浓度测定试剂盒>

PC0020 BCA蛋白浓度测定试剂盒

注:本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合于Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法。

·蛋白提取

产品货号 产品名称 说明

R0010 高效RIPA组织/细胞裂解液 在普通RIPA的基础上改进而来,含蛋白酶抑制剂及磷酸 酶抑制剂(配有一支PMSF)

R0020 RIPA组织/细胞裂解液 RIPA经典配方,适于绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免 疫实验。组成: 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存: 4 ºC避光

R0030 非变性组织/细胞裂解液 非变性条件下裂解的蛋白产物最大限度地保留了蛋白 的特性和功能,如抗原-抗体结合或酶学活性,因此 适宜于进行免疫共沉淀。

R0050 核蛋白提取试剂盒

BC3640 全蛋白提取试剂盒

BC3720 植物蛋白提取试剂盒

BC3710 全蛋白提取试剂盒(强)

BC3711 全蛋白提取试剂盒(中)

BC3730 磷酸化蛋白提取试剂盒

BC3740 胞浆蛋白提取试剂盒

蛋白含量测定是以标准蛋白作为对照,根据蛋白浓度不同,吸光值不同而达到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值(紫外光谱吸收法)来定量,但更多的是用染料对蛋白进行染色,利用染料与蛋白结合显出与原染料及蛋白不同的吸光值来定量的。后一种方法应用更普遍。蛋白定量方法的选择,应该考虑到蛋白结构(标准品选择)、蛋白溶液内干扰物等因素的影响。

·蛋白定量

产品货号 产品名称 组成说明

PC0010 Bradford蛋白浓度测定试剂盒 5×G250染色液 100ml 2-8BSA(5 mg/ml) 1ml -20ºC

PBS稀释液 30ml 2-8 干扰物质少, Tris、糖、甘油、 巯基乙醇、氨、EDTA等均不干扰测定。

PC0020 BCA蛋白浓度测定试剂盒 BCA Reagent 100ml 2-8Cu Reagent 3.0ml 2-8BSA (5 mg/ml) 1ml -20ºCPBS稀释液 30ml 2-8 BCA法的显 著优点是不受去垢剂的影响。

PC0030 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒 Folin酚甲试剂A 200ml 2-8Folin酚甲试剂B 5ml 2-8

Folin酚乙试剂 20ml 2-8BSA(5 mg/ml) 1ml -20ºCPBS 稀释液 30ml 2-8 Lowry法测定较为不受脂类物质干 扰,适于脂类含量较高的样品测定。也能耐受相当浓度的 去垢剂如SDS

二、蛋白电泳

·预制胶

SDS-PAGE如今已形成成熟的方案,实验室可根据自己的情况和习惯来选择试剂。如选择123456789全部试剂可自己配制。也可以选择配制好的试剂。

系号 产品货号 产品名称 系号 产品货号 产品名称

1 T8060 TRIS 三羟甲基氨基甲烷 11 S1051 4XSDS-PAGE分离胶缓冲液(PH=8.8

2 G8200 Glycine 甘氨酸 12 S1052 4XSDS-PAGE浓缩胶缓冲液(PH=6.8

3 S8010 SDS 十二烷基硫酸钠 13 P1016 4×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)

4 A8080 Acrylamide 丙烯酰胺 14 P1015 4×蛋白上样缓冲液(DTT)

5 M8200 N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉双丙烯酰胺 15 D1070 1M DTT

6 A8090 Ammonium Persulfate 过硫酸胺 16 A1030 10%过硫酸氨

7 D8220 DTT 二硫苏糖醇 17 T1020 1M Tris-HCL (PH6.8)

8 M8210 β-Mercaptoethanol β-巯基乙醇 18 T1010 1.5M Tris-HCL(PH8.8)

9 T8090 TEMED 四甲基乙二胺 19 S1010 10%SDS

10 A1010 30%丙烯酰胺(29:1 20 T1070 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液

·制胶

凝胶配制表(一)

分离胶12% 分离胶10% 分离胶8% 浓缩胶(3%

总体积 10ml 10ml 10ml 5ml

4X分离胶缓冲液(PH8.8 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0

4X浓缩胶缓冲液(PH6.8 0 0 0 1.25ml

30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml

ddH2O 3.4ml 4.1ml 4.7ml 3.2ml

10%过硫酸铵 100ul 100ul 100ul 75ul

TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul

凝胶配制表(二)

分离胶12% 分离胶10% 分离胶8% 浓缩胶(3%

总体积 10ml 10ml 10ml 5ml

30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml

1M Tris-HCL (PH6.8) 0 0 0 0.625ml

1.5M Tris-HCL(PH8.8) 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0

10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ul

ddH2O 3.3ml 4.0ml 4.6ml 3.75ml

10%过硫酸铵 100ul 100ul 100ul 75ul

TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul

本公司的丙烯酰胺是291的,如需要定制其他规格的可以联系我们。 为了客户实验方便,我们生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(P1200)和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒(P1320),后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分离。包含了制胶的全部试剂,方便客户操作。 如果您想节省时间,也可以使用我们的预制胶,无需配胶,直接跑电泳即可。

·上样及电泳

本公司的上样缓冲液既有用于非变性的(P1017p1027)又有变性的(P1015P1016P1017P1018),有不同的稀释倍数,可以满足客户的多种实验需求。 电泳缓冲液既有用于普通的tris-甘氨酸缓冲系统的产品(T1070),又有用于Bis-tris这种系统的MOPS缓冲液(T1510) 蛋白marker有多种,非预染marker、预染marker、彩虹markerWestern Blot Marker。而且还有GE原装的变性非变性marker,广泛的分子量和用途供您选择。

产品货号 产品名称 产品货号 产品名称

P1015 4×蛋白上样缓冲液(含DTT P1016 4×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)

P1018 2×蛋白上样缓冲液(含DTT P1019 2×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)

P1017 4×非变性蛋白上样缓冲液 p1027 2×非变性蛋白上样缓冲液

T1070 5×Tris甘氨酸电泳缓冲液 T1510 Tris-Mops缓冲液(10×)

PR1300-15 次高分子量蛋白质标准 15T PR1400-20 低分子量蛋白质标准(14.4-97.4KD) 20T

PR1500-10 次高分子量蛋白质标准 10T PR1600-20 预染低分子量蛋白质(14.4-97.4KD) 20T

PR1700-10 预染次高分子量蛋白质标准 10T PR1800-10 Western Blot Marker 10T(50ul

PR1900 预染超低分子量蛋白marker3.3-31KD) 20T PR1910 彩虹180广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

PR1920 彩虹245广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) PR1930 彩虹245plus广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

·染色

跑胶后的染色可以用银染或者考染的方法,如果蛋白量少,推荐使用灵敏度高一些的银染试剂盒(G7210),否则常规染色可以使用(P1305)和(P1300),其中P1300的优点是染色时间短,半小时内即可检测到蛋白电泳条带,节省了染色脱色的时间。

产品货号 产品名称

C8430 考马斯亮蓝R 250染色液

P1300 考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液

P1305 考马斯亮蓝染色套装

G7210 PAGE凝胶银染试剂盒

PG00810-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 8% 10/

PG01010-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 10% 10/

PG01210-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 12% 10/

PG01510-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 15% 10/

PG41510-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 415% 10/

PG42010-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 420% 10/

PG82010-S Precast-Gel预制胶 变性预制胶 10 820% 10/

PG00810-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 8% 10/

PG01010-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 10% 10/

PG01210-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 12% 10/

PG01510-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 15% 10/

PG41510-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 4-15% 10/

PG42010-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 420% 10/

PG82010-N Precast-Gel预制胶 非变性预制胶 10 820% 10/

三、Western blot

经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如**纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分,此技术称为免疫印迹(Western blot)。Western blotting检测系统除需要过氧化物酶标记的各种二抗外,还需要配套的显色试剂。索莱宝提供DAB显色和ECL化学发光两种试剂及相应试剂盒。

·转膜

MilliporePALL公司的尼龙膜和pvdf膜,具有0.22um0.45um两种规格。 转膜后还可以用P001210×丽春红)检测转膜效果,尤其是针对NC膜效果更佳。 为了节省成本和时间,您可以选择本公司的SW3020Western Blot膜再生液)对用过的膜进行清洗,随后,可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验。 膜再生液实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下将抗体洗脱下来,实际操作中,膜类型、抗体类型、浓度及抗原特性都影响洗脱难易度。 注意:适用于 ECL和类似的化学发光试剂进行的 Western 检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western检测,例如DABNBT/BCIP

产品货号 产品名称

P0012 10×丽春红

SW3010 膜封闭液

A1800 抗体稀释液

A1810 一抗稀释液

A1820 HRP标记抗体稀释液

A1830 AP标记抗体稀释液

A1840 荧光抗体稀释液

T1085 1×TBST

实验操作过程中您可以针对不同的抗体选择上面合适的稀释液。

·显色

Western blotting DAB检测试剂盒 本试剂盒适合加一抗后的后续显色。操作简单,适合重组等高表达蛋白的检测,其敏感性不如ECL法。

产品货号 产品名称 说明

SW1010 Western blotting (小鼠IgG)DAB显色试剂盒 可配制250ml二抗和100ml显色液,适合 一抗为小鼠IgG

SW1020 Western blotting(IgG)DAB显色试剂盒 可配制250ml二抗和100ml显色液,适合 一抗为兔IgG

SW1030 Western blotting(山羊IgG)DAB显色试剂盒 可配制250ml二抗和100ml显色液,适合 一抗为山羊IgG

SW1040 Western blotting(小鼠/IgG)DAB显色试剂盒 可配制250ml二抗和100ml显色液,适合 一抗为小鼠和兔IgG

试剂盒内容:

1.封闭试剂:30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白,缓冲盐等混合物。

2.10倍浓缩抗体稀释液,50ml

3.HRP标记二抗,0.5ml,效价1500-3000

4.20DAB浓缩显色液,5mlA+5mlB

Western blotting ECL化学发光检测试剂盒 本试剂盒适合加一抗后的后续显色。敏感性比DAB10倍。适合组织及细胞中常规蛋白的检测,但需有暗室等相关配套条件。

产品货号 产品名称 说明

SW2010 Western blotting(小鼠IgG)ECL显色试剂盒 可配制250ml二抗和50ml显色液,适合一抗 为小鼠IgG

SW2020 Western blotting (IgG)ECL显色试剂盒 可配制250ml二抗和50ml显色液,适合一抗 为兔IgG

SW2030 Western blotting(山羊IgG)ECL显色试剂盒 可配制250ml二抗和50ml显色液,适合一抗 为山羊IgG

SW2040 Western blotting(小鼠/IgG) ECL显色试剂盒 可配制250ml二抗和50ml显色液,适合一抗 为小鼠和兔IgG

试剂盒内容:

1. 封闭试剂:30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白,缓冲盐等混合物。

2. 10倍浓缩抗体稀释液,50ml

3. HRP标记二抗,0.1ml,效价12000-5000

4. ECL显色液,25mlA+25mlB



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日期 数量
2018-12 10
2019-1 2
2019-2 0
2019-3 1
2019-4 0
2019-5 0

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