脂质体制备中的切向流过滤(三)

  • 来源:瑞普利金(上海)生物科技有限公司
  • 时间: 2017/9/1
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    化学疗法被广泛用于乳腺癌患者的治疗。但是,大多数抗癌药物不能区分癌细胞和正常细胞,导致严重的系统性毒性。此外,化疗过程中的获得性药物耐受会进一步降低治疗效果。而使用合适的治疗策略,如纳米药物载体,包括脂质体/免疫脂质体,可能可降低不必要的化疗副作用,克服获得性多药物耐受,进一步调高治疗效力。

    脂质体是美国FDA批准的球状脂质双层药物递送载体,具有良好的生物相容性和生物可降解性,作为纳米级别的载体,其具有良好的通用性,可携带疏水性和亲水性药物,且经表面PEG修饰后,具有较长的血液循环时间,所以被广泛的研究和使用。

    本文研究了使用脂质药物递送载体,结合贝伐单抗和化疗,治疗HER2/MDR双阳性乳腺癌细胞。抗肿瘤血管生成的胞外药物(贝伐单抗)借由长循环脂质体选择性递送至乳腺癌组织的间质空间。通常使用的蒽环类化疗药物,阿霉素(DOX),通过免疫脂质体形式选择性递送至乳腺癌细胞,提高效力,降低副作用。人表皮生长因子受体2(HER2)抗体作为靶向配体,通过配体-受体反应,促进免疫脂质体DOX的内化过程。

    贝伐单抗脂质体及DOX免疫脂质体制备

     

    脂质体由50%氢化大豆L-α-磷脂酰胆碱、45%胆固醇、3% DSPE-PEG2000和2% DSPE-PEG-马来酰亚胺组成,通过溶剂蒸发和薄膜形成法制备。 

    贝伐单抗用被动载入法载体脂质体。操作时,将脂质以合适的量溶解于氯仿,溶剂先氮气吹干,再冻干机内过夜冻干。之后,用含有贝伐单抗的缓冲液对脂质薄膜进行水化,悬液过200nm膜挤出11次。 

    DOX通过硫酸铵梯度,主动载入脂质体脂质双分子层,梯度通过使用MicroKros 中空纤维组件切向流过滤进行洗滤,以磷酸盐缓冲液置换脂质体外的硫酸铵而形成。DOX/脂质比为1:5。未包封的脂质体层析去除。DOX包封后,载有DOX的脂质体与抗HER-2抗体偶联。操作时,先用2-亚氨基噻吩对鼠单克隆抗人-HER2抗体进行硫醇化处理,然后抗体上引入的巯基与脂质体DSPE-PEG2000的马来酰亚胺基团偶联,形成免疫脂质体。未偶联的抗体层析去除。


     

    贝伐单抗脂质体及DOX免疫脂质体组合治疗效力


    实验制备的新型脂质体组合系统使用HER2阳性和多药物耐受乳腺癌细胞系(BT-474/MDR)进行体外测试,使用移植瘤小鼠肿瘤模型进行体内测试。

    体外细胞培养实验显示,免疫脂质体递送可形成较高的DOX细胞核积聚,而由于P-gp的作用,游离的DOX大部分在细胞膜附近和细胞质内。结合贝伐单抗脂质体和DOX免疫脂质体,可获得最佳的肿瘤生长抑制和最低的毒性。

    荧光显微镜显示的DOX在BT-474/多药物耐受细胞中的分布。

     

    在60天的观察周期内,肿瘤尺寸稳定降低,说明通过靶向递送,DOX和贝伐单抗存在协同效应。实验结果清楚地显示,在组合性脂质体药物递送组中,肿瘤生长被显著延迟。这种新型的组合治疗方法对于HER2/MDR双阳性乳腺癌患者具有较高的治疗潜力。

    原文:Y.Tang, F.Soroush,Z.Tong,et al., Targeted multidrug delivery system to overcome chemoresistance in brease cancer. International Journal of Nanomedicine, 2017:12 671-681.

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