甲基化检测

来源: 广州莱德尔生物科技有限公司   2013-10-11   访问量:1872评论(0)

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高度甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生。目前,基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术,分为甲基化特异性PCR(Methylation specificPCR,MSP)和硫化测序PCR(Bisulfite sequencing PCR, BSP)。

技术原理:1.MSP:DNA经亚硫酸氢钠处理后,所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列差异,设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物,结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开。这种方法灵敏度高,对DNA的质和量需要少。

2.BSP:甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变,用一对特异性引物扩增后测序,再与DNA原始序列比对确定甲基化位点。测序法克服了只能针对单个位点检测,并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点,可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测。

服务流程:

1、 根据目的基因启动子序列设计相应引物;

2、基因组DNA的提取和定量;

3、亚硫酸氢钠修饰基因组DNA;

4、修饰后DNA纯化回收;

5、a.结合实时定量PCR的qMSP; b.BSP,对PCR产物进行测序并与未经处理的序列比较;

6、数据处理;
7、 向客户提交数据分析结果与实验报告。



客户提供:
尽可能新鲜和足量的组织(≥50mg)、细胞样品(≥106)或全血(≥300μl),或直接提供纯化好的DNA(≥5μg/样品)。

我们提供:
原始数据及实验结果和方法报告单。



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