磷酸化修饰与磷酸化多肽

来源: 浙江鸿拓生物技术有限公司   2015-4-30   访问量:2649评论(0)

磷酸化修饰是一种蛋白质化学修饰,对蛋白质功能的改变和完成起到重要作用。对于该领域的研究目前还存在很多技术难点,对该领域研究形成了挑战近年来相关技术有了很多突破,磷酸化研究也取得了很多突破。


蛋白质的动态变化与生命活动密切相关,很多情况下某些蛋白质的绝对量并不会发生明显变化,通过各种翻译后修饰来改变或完成其功能。在众多的蛋白质翻译后修 饰中,磷酸化修饰是十分重要的一种,在当今所有蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰,如DNA损伤修复,信号转导,转录调节,细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白 质及多肽的研究可帮助我们阐明过程的机理,从而来进一步认识生命活动的实质。近年来不断出现的许多相关的新技术,新方法推动了该领域研究的进展。

磷酸化氨基酸的连接通常采用的方法是HBTU/HOBt/DIEA,但是目前用该法合成磷酸化多肽也有一些缺点,尤其是在合成多磷酸化长肽或多肽的时候, 连接效率很低,最后产品的纯度也很低,对于这种磷酸化多肽产品,经过我们的研究考虑采用后磷酸化方法,其合成过程主要就是在多肽合成结束之后,选择性的脱 去要标记的氨基酸的侧链保护基,对于Tyr,Thr可以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应,在1% TFA/DCM条件下可以定量的脱除。后磷酸化,可以采用双苄基亚磷酰胺,四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体,连接到羟基上,然后在过氧酸下氧化生成磷酰 基,完成反应。

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