OperettaCLS 高内涵筛选平台:抗体结合力的高通量免洗检测

来源: 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司   2018-4-10   访问量:373评论(0)

筛选是抗体药物研发流程的开端,从成千上万个单克隆细胞系分泌的上清液中筛选得到特异性抗体一直是药物初期研发的核心领域。对于如今全面提速的抗体药物研发市场,快速、高效地完成筛选工作有着重要的意义。

ELISA(针对蛋白抗原)和流式细胞仪(针对细胞膜表面抗原)仍是被广泛应用的筛选方法,但是它们都有着各自的局限性。ELISA筛选方法针对的是表达纯化后的蛋白抗原,构象与在细胞内表达时有所不同,导致筛选得到的高亲和力候选抗体可能为假阳性,而且ELISA方法需要繁琐的洗板和孵育,极大地增加了工作量;流式细胞仪筛选方法针对的是细胞膜表面抗原,但是需要耗费大量细胞,而且细胞通过胰酶消化的过程也会对表面抗原有一定影响。

我们平台基于珀金埃尔默公司最新型的 Operetta CLS高内涵分析仪建立的高通量抗体筛选平台有效地解决了以上问题。由于配备了共聚焦模块,该仪器能够直接对含有高浓度荧光二抗的96, 384或1536孔板内贴壁细胞进行荧光成像而不受高背景荧光影响,从而实现了对细胞表面抗体结合荧光信号的高速自动化免洗检测(此方法已经通过我们严格的内部实验进行了反复验证)。相较于ELISA或流式技术,高内涵分析技术可以显著降低抗体药筛选过程中的试剂耗材、人力及时间成本。

此筛选平台的操作流程简单且全程无需清洗步骤:1,选择待检测靶点的细胞孔板;2,加入待检测抗体孵育;3,加入二抗孵育;4,通过 OperettaCLS 检测分析结果。


图1,Operetta CLS高内涵筛选平台操作流程示意图。

针对Immuno-Oncology相关靶点,我们均构建了其过表达稳定细胞株,现可提供服务的靶点孔板如图2中所示。

图2,Immuno-Oncology相关靶点的过表达稳定细胞株构建。A,已完成的和正在构建中的靶点;B,CHO-K1(PD-L1)单克隆的流式检测结果;C,通过Operetta CLS高内涵分析仪对过表达细胞系进行单克隆追踪验证。

选择好心仪的靶点后,只需要将待测上清交给我们,您就可以得到如图3中有图有真相的实验结果,检测下限可达5 ng/ml。

图3, Operetta高内涵筛选平台检测Anti-PD-L1抗体结合能力。
 
目前该服务已全面对外开放,欢迎所内外感兴趣的老师咨询。
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濮科锋 (kfpu2011@sinano.ac.cn / 18651111318)
郑克孝 (kxzheng2007@sinano.ac.cn / 18015595729)

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4月初珀金埃尔默与中科院苏州纳米所纳米生化平台共建了合作实验室。相关ppt课件可前往如下地址点击下载:



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