什么?人体微生态取样竟然这么多讲究~

来源: 安诺基因   2019-3-20   访问量:1115评论(0)

诺贝尔奖得主里德伯格(Lederberg)提出“人是与共生微生物构成的超级生物”。多种微生物共同组成人体微生态系统。人体微生物组与人体多种系统疾病息息相关,因此开展人体微生态研究非常重要。今天小编盘点了那些人体微生态的取样策略,帮助各位小主们更好地开展相关研究工作。

肠道微生物取样方法

 

 

方法一[1]

 

 

a. 用无菌勺挖取粪便中段没有接触空气和地面的部分,挖取2-5 g。

b. 将粪便连同小勺一同放入收集管中,盖紧盖子(如果有保护液的情况下需摇晃管子使粪便和保护液充分混匀)。

c. 将采样管统一收集放置于冰箱冷藏层,3天内干冰寄送到实验室。


方法二[2]

a. 使用前洗净双手,防止杂菌干扰检测结果;取出取样管,置于取样盒圆孔中固定。

b. 用无菌棉签擦拭卫生纸,收集微量排泄样品(2-5 g)。

c. 将取样完毕后的棉签完全浸入到取样管的保护液中,搅拌1分钟,保证样品与保护液充分接触。然后拧紧取样管,快速摇晃取样管至少30秒。

d. 常温运输。


方法三:

不易获得粪便时,可采用直肠拭子法采集。

a. 用肥皂水和70%的酒精清洁肛门周围,将无菌拭子用生理盐水湿润后插入肛门4~5 cm (幼儿2~3 cm),在肛门括约肌处轻柔的旋转,于肛门隐窝处取样,可在拭子上明显见到粪便,将棉拭子头部剪落入无菌离心管中,每个样本提供1-3个棉拭子。

b. 置于冰/干冰条件下泡沫盒中,24 h内运输到实验室,-80℃保存。 

 

呼吸道微生物取样方法

 

01

鼻腔取样

  

尽可能使明亮的光线照进鼻腔,将洁净的鼻咽拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。将拭子头浸入采样液中,拧紧盖子,-80保存。

 

02

咽喉取样

 

 

a. 明光照进口腔,让患者深呼吸,然后发“啊”音,用压舌板轻轻压舌,再用咽拭子来回擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁。

b. 将拭子头浸入采样液中拧紧盖子。标本收集完后,应在4℃条件下、48h内送至实验室质检;如不能在48h内处理标本,应将标本放在-80℃以下环境中保存。 

 

03

肺泡灌洗液取样[3]

 

a. 口咽部麻醉后将支气管镜引入到取样部位(声带,支气管等),50-150 mL无菌生理盐水滴注后抽取。

b. 灌洗液可通过过滤或离心的方式富集,富集后液氮速冻,-80℃保存,干冰寄送。


口腔微生物取样方法

 

01

口腔唾液取样

 

方法一:

受试者禁食水,采集唾液量1.5 mL/份,-20℃保存[4-5]


方法二:

采用商业化唾液采用管取样(SARSTEDT,德国);采样管液氮速冻,用自封袋封存,-80℃保存,干冰寄送。


02

口腔组织样本

 

 棉拭子刮取,刮取后将棉拭子头(2-3个)剪下放入灭菌冻存管,液氮速冻,-80℃保存。棉拭子可用无菌生理盐水或PBS润湿,以增加微生物附着率。

舌背部:刮取舌中心 1 cm2 的部位,约5s。


上颚:刮取整个坚硬的上颚,约10s。


口腔粘膜:刮取左侧和右侧的整个口腔粘膜区,每侧约 10s,要注意不要接触到牙齿。


角质化的牙龈:刮取颚前方的牙龈,约10s。


腭扁桃体:分别刮取左侧和右侧的腭扁桃体5s。


咽喉:由于条件反射,这个部位非常难收集,若需要取,建议取完别的部位后再取。慢慢地将拭子放入咽部后方,约5s。注意不要刮到扁桃体。


龈上牙菌斑[6-7]记录牙菌斑取自哪颗牙齿,如臼齿,前臼齿,门牙。 先干燥取样的部位,用棉拭子刮取尽可能多的牙菌斑。


龈下牙菌斑[6-7]与龈上牙菌斑处理方式相同,需要注意要清除残留的龈上牙菌斑,并注意要丢弃有出血的样本。

   

 

看完上述分享后是不是发现原来人体微生态取样竟然这么多讲究~这是小编查阅了多篇文献资料整理的。正确的取样是实验顺利开展的第一步,如此经典的取样策略盘点赶紧收藏,后续再也不用问师兄师姐如何取样啦~

 


 

 

参考文献

 

[1] Kyle G. Bowel care. Part 3--obtaining a stool sample[J]. 2007, Nurs Times, 103(44):24-5.

[2] HMP Protocol#07-001, 2009, IHMS_SOP_05_V2.

[3] Bassis CM, Erb-Downward JR, et al. Analysis of the upper respiratory tract microbiotas as the source of the lung and gastric microbiotas in healthy individuals[J]. 2015, MBio, 6(2):e00037.

[4] 王少果,游祥磊,等. 16SrRNA高通量测序研究有龋者唾液微生物群落结构及多样性[J]. 口腔医学研究,2015, 31 (5) :461-465.

[5] 李俊平,吴芳,汪珍珍,等. 16S rRNA克隆文库法分析成人龋病唾液微生物多样性[J]. 口腔医学研究,2016, 32 (3) :272-277.

[6] Jorth P, Turner KH, et al. Metatranscriptomics of the human oral microbiome during health and disease[J]. 2014, MBio, 5(2):e01012-14.

[7] 张丽菊. 454焦磷酸测序对乳牙龋及牙面色素沉着伴龋龈上菌斑及唾液微生物菌群研究[D]. 昆明医科大学, 2015.

 

文章来源:安诺基因



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