聊聊细胞分离和培养那些事儿

来源: 北京索莱宝科技有限公司--实验室产品   2019-7-12   访问量:2048评论(0)

细胞培养是生命科学研究的重要方法之一。同时,在原代细胞培养的过程中,首要任务是从组织中分离细胞。但看似简单的细胞分离和培养技术,却不知难倒了多少英雄好汉。下面索莱宝和大家聊聊细胞分离与培养那些事儿。

如何分离细胞?

从原代组织中分离细胞,将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。然而,为了更好地测定细胞免疫功能,我们需要从动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞单核细胞粒细胞等。分离这类免疫细胞的方法有:密度梯度离心法、黏附分离法、流式细胞仪分离法等其他分离法。目前最常用的是密度梯度离心法。索莱宝细胞分离液产品的研发原理就是基于不同细胞的密度差异,通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布

具体怎么实现呢?

以分离人外周血淋巴细胞为例:

  1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

  2. 在离心管中加入适量分离液,将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。

  3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min。

  4. 离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。

  5. 小心地吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。

  6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

  7. 重复步骤6。

  8. 弃上清,细胞重悬备用。

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细胞分离时别忘了做到这些!

  1. 无菌操作:在样品收集和分离过程中,应注意无菌操作,避免微生物污染。

  2. 保证新鲜:血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2 h以内),避免冷冻和冷藏,最优抗凝剂选择为EDTA、枸橼酸和肝素。

  3. 分离液的保存:分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。

  4. 细胞稀释及细胞洗涤液:稀释或洗涤细胞不可使用含的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。

  5. 注意添加顺序:样品在上,分离液在下,保持两液面界面清晰。

  6. 离心管:选用玻璃材质离心管。部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。

  7. 离心:血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。

如何选择细胞分离液产品?

1.要有针对性地选择产品。不同细胞的密度与体积是不同的,不同种属动物细胞的密度也是不同的。索莱宝针对不同客户科研需求,研发了不同种细胞的分离液,如:淋巴细胞分离液、粒细胞分离液、白细胞分离液和单个核细胞分离液;针对不同种属动物,研发了不同动物的细胞分离液,如:人、小鼠、大鼠、鸡、兔、牛、狗等等。同时,索莱宝细胞分离液系列产品满足了外周血、组织脏器、骨髓等不同样品的分离。索莱宝丰富多样的产品满足了客户的多种科研需求。

2. 要选择分层效果明显的产品。索莱宝细胞分离液产品,性价比高,分层效果明显。以人外周血淋巴细胞分离液为例,索莱宝分离液产品分离的白膜层非常清晰,而且白膜层没有弥散,效果优于其他品牌同类产品。

分层图

3.要选择细胞沉淀纯度高的产品。使用索莱宝的细胞分离液产品得到的淋巴细胞较为纯净,红细胞污染极少,纯度大于90%。比其他品牌分离液分离的效果都好。

沉淀对比图

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细胞培养要注意哪些?

  1. 无菌的环境与操作:在细胞培养的过程中,应保持无菌的实验环境并进行无菌操作。

  2. 培养液的选择:每种细胞应该选择适合它的培养液。索莱宝的多种细胞培养液产品满足了不同细胞的需求。

  3. 温度与pH值的监控:一般选择37℃和5% CO2培养体系。细胞培养液偏黄色的时候应及时更换培养液。

  4. 预热培养液:为了使细胞更好地贴壁,应注意提前预热培养液。

  5. 避免培养液暴露在荧光下:平时应注意将培养液储存在黑暗的环境中,荧光(紫外光)对于培养液(有细胞或无细胞)有不利影响。

  6. 传代接种密度:在细胞传代的过程中要保证合适的接种密度。通过细胞计数来控制细胞传代的接种密度。同时,要注意观察细胞的状态和生长速度。

  7. 避免细胞损伤:在细胞消化传代时,应注意胰蛋白酶的浓度以及消化的时间。轻柔地吹打细胞,避免机械损伤,选择适当的离心力。

  8. 细胞冻存与复苏:冻存液中要加入保护剂:甘油或二甲基亚砜(DMSO)。冻存时要进行梯度降温。细胞复苏选择在37℃的水溶液中进行,解冻细胞速度要快。解冻后,细胞冻存管外壁要用纸擦干,避免污染。

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