如何培养干细胞,选择脐带第一条

来源: 友康恒业生物科技(北京)有限公司   2019-8-22   访问量:1168评论(0)


“为什么没有爬出来原代细胞?”“为什么爬出的原代细胞不多?”“为什么爬出的原代细胞状态不好?”
....................................
出现这些情况时,我们需要从多方面查找原因。
想要养出优质的脐带间充质干细胞,首先,就要先选择好脐带。那么该如何选择呢?

一、非常必要的初筛
选取脐带时,一定要确保:
宝*无乙肝、丙肝、梅毒、AIDS等传染性疾病,无恶性肿瘤及各种遗传性疾病,妊娠期内无严重合并症,无家庭遗传性疾病史;活宝宝,无畸形。

二、将脐带运输至实验室需注意的问题
注:脐带的运输条件,对分离原代MSC细胞的影响较大。
1、4℃环境下运输
运输脐带时,应将脐带浸泡在DPBS或基础培养基里,在4℃环境下运输。如添加抗生素,建议使用庆大霉素(终浓度为25mg/L)。
此处可能会有老师问,“可以使用青链霉素吗?”
出于安全角度,不建议使用青链霉素!因为青霉素致敏性强,容易发生过敏与交叉过敏,而且一旦发生过敏性休克,如果抢救不及时或不当的话很容易导致死亡。
2、应避免通过安检CT机器
运输时应避免通过安检CT机器,例如地铁安检等,会影响干细胞的爬出;
也可能导致细胞发生基因突变,存在安全隐患。

三、通过初筛后的脐带样本都适合分离原代细胞吗?
并非所有的脐带都适合做原代分离。判断脐带是否合适有以下标准:
脐带无大范围凝血,为乳白色,未发生水肿等病变,华通氏胶部分含量丰富等。

四、什么样的脐带样本不建议使用?
请慎重选择样本。当样本有以下几种问题时,均属于不良样本,培养结果不可预期,建议弃置:
1、脐带过细的样本
常规脐带直径为1-2cm,过细的脐带很难剥离出合适大小的华通氏胶,甚至剥不出华通氏胶;
2、水肿的脐带
该类脐带很难爬出质量合格的干细胞;
3、严重凝血或被血渗入的脐带
该类脐带能爬出细胞,但血细胞很多,会阻碍干细胞爬出及生长,导致收获原代数量较少;
4、保存时间过久的脐带
保存时间越久,细胞越难爬出(3天以上的脐带建议弃置)
5、保存液内的抗生素含量过高的脐带
保存时,过高的抗生素浓度会抑制干细胞的爬出;
6、经过安检CT机器的脐带
如果脐带通过安检CT机器,例如地铁安检等,会影响干细胞的爬出;也可能导致细胞发生基因突变,存在安全隐患;
7、未被浸润的脐带或华通氏胶
应始终保持脐带及华通氏胶块湿润(可用完全培养基润湿),否则会影响细胞爬出。

 

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