BI教您如何做好细胞冻存与复苏?

来源: 上海逍鹏生物科技有限公司   2019-10-18   访问量:681评论(0)

BI教您如何做好细胞冻存与复苏?

经常有用户反映,细胞冻存与复苏遇到了问题!

那如何让细胞安心沉睡,

再满血复活?

逍鹏生物的老司机为此做了总结。。。。

选 好 细 胞 冻 存 液 是 基 础

使用动物血清常常会遇到很多问题,例如:病毒感染、其他动物源的污染。使用无血清制品培养与冻存细胞,可以消除这方面的隐患。此外,无血清冻存液可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长,更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。

 

慢 慢 做 冷 冻

若您养的是贴壁细胞,请先将细胞消化下来;若是悬浮细胞,请直接按以下步骤进行:

1. 以200-300g离心3分钟,弃去上清,收集细胞。

2. 用BI无血清冻存液将细胞重悬(不需回温),将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml,添加到冻存管中(一般每管1ml)。

3. 建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中,置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜(或不需要程序降温)。

4. 将冻存管迅速移到液态氮中保存。

5. 冻存24小时后,建议检测细胞存活率。

 

迅 速 做 复 苏

1. 将细胞冻存管由液态氮中取出,置于室温回温,不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养 基、无菌15ml离心管、培养瓶。

2. 在生物安全柜内,直接以少量培养基反复冲融,使细胞团块化冻。

3. 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g,3分钟离心收集细胞。

4. 倒去上清液,重悬细胞,移到培养瓶中培养。

hESC were frozen in CryoStem and were thawed into NutriStem hESC XF Medium

(H1 hESC BGO1V/hOG cells)

1 hour post-thawing

Day 1 Post-thawing

Day 4 Post-thawing
yoyo~~ BI 冻 存 液 来 一 套

不含动物成份

细胞冻存与复苏后,平均活细胞回收比例超过90%

Serum-Free Cell Freezing Medium

无血清细胞冻存液,货号: 05-065-1A/B

无血清培养的细胞应该使用无血清的冻存液保存,以保持无血清培养体系的完整。本冻存液不含蛋白及动物组分,主要成分为DMSO和甲基纤维素。


Cryostem ACF Freezing Media

无血清干细胞冻存液(Optimized for Stem Cell),货号: 05-710-1B/E

CryoStem对所有种类的细胞都有非常好的冻存效果,该产品经过验证,特别适用于人胚胎干细胞和人原代细胞的冻存。用CryoStem冻存融解后,细胞表现出极佳的复苏率、生长活性、贴壁性和传代能力。


MSC Freezing Medium

无血清间充质干细胞冻存液,货号: 05-712-1B/E

即用型溶液,特别适用于人类间充质干细胞冻存,用MSC冻存液冻存融解后,细胞表现出极佳的复苏率、生长活性。

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