为什么很多研究人员更喜欢用多克隆抗体进行IHC/IF实验?

来源: 北京博奥森生物技术有限公司   2020-2-26   访问量:575评论(0)

单克隆抗体和多克隆抗体都广泛应用于IHC/IF检测。然而,与多克隆抗体相比,某个单克隆抗体的使用效果,在不同的样品中可能存在显著的差异。揭示这种表象背后的原因,将是一件很有趣的事情。

我们都知道,在IHC/IF样品制备的过程中,生物样本的抗原性将面临巨大的挑战,尤其是石蜡包埋样品。化学试剂以及不良的物理条件可以很容易地破坏或阻断目标蛋白(抗原)中的某些抗原表位。一旦某个特定的抗原决定簇在IHC/IF样品制备过程中被破坏,其专一性的单克隆抗体将失去检测到这个抗原的机会,从而造成假阴性的结果。相比之下,多克隆抗体能够在同一抗原上识别多个表位,即使在某一表位特性丧失的情况下,目标蛋白上的其它抗原表位仍然可能被抗体识别,从而表现出完美的实验结果。此外,高质量的多克隆抗体由多种抗体分子组成,它们分别识别抗原上的一系列抗原表位。当进行IHC/IF检测时,每个抗原分子可以结合多个不同的抗体分子,在检测结果中显示出很强的信号,从而极大的提高抗原检测的灵敏度。

此外,自然界中的许多蛋白质,由于表达过程中存在的剪切差异,有不同的变形体存在。如果某个蛋白表位并不是均一性的存在于所有变形体中,其特异性单克隆抗体就无法识别所有的蛋白变形体。这一限制将直接影响对于该蛋白质家族的功能及作用的整体研究。显而易见,多克隆抗体具有识别多个抗原表位的特性,在IHC/IF试验中,受到这种限制的影响较小,其抗原检测的表现就会更好,体现出优良的抗原检测灵敏度。

综上所述,鉴于多克隆抗体整体上具有较高的抗原识别灵敏度,经验丰富的科学家们在IHC/IF检测中更喜欢使用多克隆抗体,而非单克隆抗体。

Bioss提供经过验证的多克隆抗体,以支持科学研究,其中许多产品已在科学杂志上报道。



尽管有前面的讨论,许多优质的单克隆抗体在IHC/IF应用中依然有良好的表现。因此,当你在决定使用单克隆抗体还是多克隆抗体时,必须考虑具体的实验条件和目的。下面我们就来总结一下每种抗体的优缺点。
多克隆抗体 单克隆抗体

优点

抗原检测的高敏感性,由于抗体结合多个表位,即使在低表达水平下也能帮助放大来自目标蛋白的信号。
单一表位的高度特异性,降低交叉反应的风险。
对变性或构象改变的蛋白质有良好的检测性能
定量蛋白质含量时,结果会更好
高度稳定及宽泛的pH值或缓冲变化
批次间稳定

缺点

批次间不稳定
用于检测变性状态或构象改变的蛋白质的性能较差
如果免疫原的设计和选择不严格,交叉反应的可能性更大
不太适合需要快速捕获目标蛋白的应用
对pH值和缓冲条件更敏感

精品IHC产品推荐

附件:点击此处查看更多IHC精品抗体产品



北京博奥森生物技术有限公司   商家主页

地址:北京市通州区马驹桥镇联东U谷西区四期67号楼
联系人:秦
电话:4009019800
传真:010-58129612
Email:sales@bioss.com.cn