Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统 ——四色荧光检测，效率更高效

摘要： 　　

  现在使用Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像系统。能够同时检测四个蛋白，大大提高了Western blot的效率。通过四色蛋白质印迹可以实现使用四个光谱不同的荧光基团和sapphire激光激发和敏感的光电倍增管（PMT）和雪崩光电二极管（APD）检测系统进行检测。

   Western印迹多重检测——同时在一个印迹膜上孵育多个探针——正在快速发展。化学发光测定允许检测单个蛋白，经过重孵育或者剥离实现检测多个蛋白，具有蛋白潜在损失和相应的信号的损失。早期Western印迹多重成像系统允许在单个印迹上同时检测两个荧光信号。研究人员迅速使用这种技术进行上样质控和目的蛋白的检测。  

  现在使用Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像系统。能够同时检测四个蛋白，大大提高了Western blot的效率。通过四色蛋白质印迹可以实现使用四个光谱不同的荧光基团和sapphire激光激发和敏感的光电倍增管（PMT）和雪崩光电二极管（APD）检测系统进行检测。

3种不同检测器检测

  Sapphire™双模式多光谱激光成像系统具有无与伦比的灵活性、出色的灵敏度和图像质量。是市场上唯一采用扫描式和CCD双模式的成像系统；使用PMT检测器进行蓝色通道和同位素标记磷屏成像，使用三个独立的APD检测器进行绿色、红色和近红外通道检测，使用CCD检测器进行高灵敏化学发光检测；动态范围更宽，分辨率可达10μm，分辨更细节，灵敏度更高。可进行四色荧光标记蛋白成像、2D-GIGE胶、in cell western、荧光标记芯片、组织切片、高灵敏化学发光、普通凝胶成像、同位素标记磷屏成像等等，给实验者更多选择。

Sapphire双模式多光谱激光成像系统

四色荧光检测实验案例如下：

材料和方法

  使用4-15%的Tris-Glycine凝胶电泳。使用低荧光PVDF膜进行转印。转印后，印记膜封闭30分钟使用Azure荧光印封闭液稀释 ratanti-tubulin（绿）， rabbit anti-beta-actin（红）和chicken anti-GAPDH（灰）一抗和anti-transferrin（蓝）以前已经被AzureSpectra 490染料标记使用AzureSpectra标记试剂盒。

将印迹膜使用Azure荧光印记漂洗buffer进行漂洗，然后使用goat anti-rat 550（绿），goat anti-rabbit 700（红），goat anti-chicken 800（灰）。 孵育后，印迹像以前一样在Azure 荧光漂洗buffer中进行漂洗，然后在PBS中最后冲洗一遍。

成像之前将印记膜晾干，使用Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统进行成像。

结果和讨论

图一：

Western blot印迹膜使用Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统进行成像、图1展示的灰色图，转铁蛋白（a），tublin（b），beta-actin (c) 和 GAPDH (d)，整合图（e）。具有更高的灵敏度，特异性，更高的信噪比，允许快速准确进行精准定量。

在一张印迹膜上同时成像四种蛋白大大增加了Western印迹的效率，节省了时间和珍贵的样品，并且可进行精准定量。 该方法还允许使用新的测定法，例如蛋白互做研究：磷酸化蛋白测定等。