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植物脱落酸(ABA)联免疫分析(ELISA)

来源: 上海联硕生物科技有限公司   2011/10/28   访问量:1604
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植物脱落酸(ABA)联免疫分析(ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:植物脱落酸(ABA联免疫分析试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于测定植物相关样本中脱落酸(ABA含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本植物脱落酸(ABA水平。用纯化的植物脱落酸(ABA抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的植物脱落酸(ABA标准品和未知浓度的植物脱落酸(ABA待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物脱落酸(ABA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物脱落酸(ABA浓度。 

试剂盒组成 

1

20倍浓缩洗涤液

50ml×1

9

标准品S160μg/L

0.5ml×1

2

链霉亲和素-HRP

6ml×1

标准品S240μg/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

标准品S320μg/L 

0.5ml×1

4

生物素标记的抗-IgG抗体

6ml×1

标准品S410μg/L 

0.5ml×1

5

显色剂A

6ml×1

标准品S55μg/L 

0.5ml×1  

6

显色剂B

6ml×1/

10

密封袋

1

7

终止液

6ml×1

11

封板膜

3

8

样品稀释液

6ml×1

12

说明书

1

标本要求 

1不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl37℃温育30分钟

6. 洗涤:操作同4

7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

8. 洗涤:操作同4

9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

线形范围:

2μg/L -70μg/L 

规格:

96人份/

保存条件及有效期

1试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

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