革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒北京索莱宝科技有限公司

金牌供应商

性能参数

产品名称: 革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒
英文名称: 革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒
产品货号: 无
产品规格: 50T/100T
产品产地: solarbio
产品商标: solarbio
价    格: 180/230元
保存与运输: RNase A,溶菌酶于-20 ℃保存,其它试剂室温保存。复检期一年。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/10/12 9:59:00
浏览人数:789
诚信指数:1359点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒

产品内容: 

试剂盒组成

D1120-50T

D1120-100T

RNaseA

250ul

500ul

溶菌酶

3ml

5.5ml

溶液

15ml

30ml

溶液Ⅱ

15ml

30ml

溶液Ⅲ

20ml

40ml

漂洗液

15ml

15ml×2

洗脱液

15ml

30ml

吸附柱

50

100

收集管

50

100

说明书

1

1

 

        使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入 RNaseA(将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入) ,混匀,置于 2-8℃保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

 

 

操作步骤:

1、取 1-5ml  细菌培养物,12000rpm离心 1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。  

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 200ul  溶液Ⅰ(请先检查是否已加入 RNaseA), 使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。再向其中加入 50ul  溶菌酶,混匀。37℃水浴 30 min  以上(根据菌液量可适当加长水浴时间)。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。如不能确定为何种菌,请按阳性菌处理。  

3、向离心管中加入 250ul  溶液Ⅱ,温和地上下翻转 6-8  次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和,以免污染基因组 DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过 5 min,以免质粒受到破坏。  

4、向离心管中加入 350ul  溶液Ⅲ,立即温和地上下翻转 6-8 次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。 11000rpm离心 10 min  。注意:溶液Ⅲ加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。  

5、将上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室温放置 2min,12000rpm  离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中(  如果一次加不完,可分两次吸附)  。  

6、向吸附柱中加入 700ul  漂洗液(  使用前请先检查是否已加入无水乙醇)  ,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。  

7、向吸附柱中加入 500ul  漂洗液,12000rpm离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。  

8、12000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR  等。  

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul  经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置2min,12000rpm离心 1min,收集质粒DNA溶液。  

10、(可选)为了增加质粒的回收率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置2min, 12000rpm离心 1min。   

注意事项:   

1、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。  

2、洗脱缓冲液体积不应少于 50ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的 pH  值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH值在 8.0 左右(  可用 NaOH  将水的 pH值调至此范围)  ,pH值低于 7.0 会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20 ℃,以防 DNA 降解。  

3、如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒,应加大菌体使用量,使用 5-10ml 过夜培养物,同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。  

4、 DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为 1  相当于大约 50 μg/ml  双链DNA、40 μg/ml  单链DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9  ,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

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    北京索莱宝科技有限公司目前备有现货1500种,当天即可发货,可以满足大部分高等院校以及高级研究所的实验要求,同时省去您焦急等待的时间。欢迎前来咨询。

 

 

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