Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
英文名称: Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
产品货号: 60210ES25
产品规格: 25mg
产品产地: YEASEN
产品商标: YEASEN
价    格: 356元
保存与运输: -20℃
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/9/16 8:46:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海翊圣生物科技有限公司
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产品详细描述

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

促销价(元)

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

60210ES25

25 mg

-20℃

678.00

356.00

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

60210ES60

100 mg

-20℃

2028.00

1356.00

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

60210ES72

250 mg

-20℃

4478.00

2886.00

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

60210ES76

500 mg

-20℃

8558.00

4896.00

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

60210ES80

1 g

-20℃

15192.00

8326.00

产品描述

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌,各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后,不会参与随后的任何反应,从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

   嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC),赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关,现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下,嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

产品性质

CAS号(CAS NO.

58-58-2

分子式(Formula

C22H29N7O5·2HCl

分子量(Molecular weight

544.43

纯度(Purity, HPLC

98%

外观(Appearance

白色至米白色粉末

结构式(Structure

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃干燥保存,2年有效。

 

使用方法

1. 建议使用浓度

哺乳动物细胞:1-10 μg/mL,最佳浓度需要杀灭曲线来确定;

大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌,使用浓度为125 μg/mL

使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身的影响。

2. 溶解方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液,经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/mL的储存液。

3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。

1Day 124孔板内5~8×104 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜;

2Day 2准备筛选培养基:含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15 μg/mL,至少5个梯度);往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37℃孵育细胞;

3Day 4:更换新鲜的筛选培养基,并观察细胞存活率。

4)根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;

5)每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物最低浓度。

4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后,细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖,以筛选出稳定转染子。

1)细胞转染48 h后,将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

】:当细胞处于分裂活跃期时,抗生素作用最明显。细胞过于密集,抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%

2)每隔2-3天,移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3)筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间,这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。

每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48 h,有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

4)转移和放置5-10个抗性克隆到一个35 mm的培养皿中,用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1)嘌呤霉素为有毒化合物,操作时请小心拿放;

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB180517

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