革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒-核酸纯化-试剂-生物在线
革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒

革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒

商家询价

产品名称: 革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒

英文名称: 1-5ml样品革兰氏阳性菌质粒DNA提取试剂盒

产品编号: D1120-100

产品价格: 0

产品产地: 北京/solarbio

品牌商标: Solarbio

更新时间: null

使用范围: null

北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
  • 联系人 :
  • 地址 : 北京市通州区马驹桥联东U谷景盛南四街85A三层
  • 邮编 :
  • 所在区域 : 北京
  • 电话 : 010-563*1250
  • 传真 : 010-56371282
  • 邮箱 : 2748554845@qq.com

革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒说明书

货号:D1120 

规格:50T/100T  

保存:RNase A,溶菌酶于-20 保存,其它试剂室温保存。复检期一年。

产品内容:

试剂盒组成

D1120-50T

D1120-100T

RNASE A

250ul

500ul

溶菌酶

3ml

5.5ml

液Ⅰ

15ml

30ml

液Ⅱ

15ml

30ml

液Ⅲ

20ml

40ml

漂洗液

15ml

15ml×2

洗脱液

15ml

30ml

吸附柱

50

100

收集管

50

100

说明书

1

1


注意:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入),混匀,置于 2-8℃保存。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤: 

1、取1-5ml 细菌培养物,12000rpm离心1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。 

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入200ul 溶液(请先检查是否已加入RNaseA使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。再向其中加入50ul 溶菌酶,混匀。37水浴30 min 以上(根据菌液量可适当加长水浴时间)。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。如不能确定为何种菌,请按阳性菌处理。 

3、向离心管中加入 250ul 溶液,温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意:混匀一定要温和,以免污染基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏。 

4、向离心管中加入 350ul 溶液,立即温和地上下翻转 6-8 次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm离心10 min 。注意:溶液加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。 

5、将上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室温放置2min12000rpm 离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中如果一次加不完,可分两次吸附。 

6、向吸附柱中加入600ul 漂洗液使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 

7、向吸附柱中加入600ul 漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 

812000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或 50温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。 

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 65水浴预热的洗脱液,室温放置2min12000rpm离心1min,收集质粒DNA溶液。 

10、(可选)为了增加质粒的回收率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心1min。 

注意事项: 

1、使用前请先检查溶液和溶液是否出现混浊,如有混浊现象,可在 37水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。 

2、洗脱缓冲液体积不应少于50ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH值在8.0左右可用NaOH 将水的pH值调至此范围pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20 ,以防DNA降解。 

3、如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5-10ml过夜培养物,同时按照比例增加溶液、溶液和溶液的用量,吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。 

4DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为相当于大约50 μg/ml 双链DNA40 μg/ml 单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9 ,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。


相关产品:


E1020 EB染色液

D1010 6×DNA Loading Buffer

T1060 50×TAE 缓冲液

T1050 5×TBE 缓冲液

M1060 D2000 DNA Ladder

M1400 1kb DNA Ladder

G8142 GoldView II型核酸染色剂(5000×)

L1015 LB固体培养基(干粉)

L1020 SOC液体培养基(干粉)