快速核酸银染试剂盒

产品信息

 快速核酸银染试剂盒产品描述

分子生物学实验中，常利用银染的方法显示聚丙烯酰胺凝胶或者琼脂糖凝胶中的核酸条带，其检测原理是：银离子(Ag⁺）可与核酸形成稳定的复合物，随后Ag⁺ 在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒，后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比EB高达200倍，常用于检测SSR标记、SNP标记等。

常规的银染方法由固定、氧化、染色、显影、终止等若干个步骤组成，操作十分繁琐，尤其不适用于大批量实验。而本品的推出可大大改善上述问题，主要体现在：1）超快速，整个过程仅需20分钟；2）操作简单，只有染色和显影两步；3）灵敏度跟常规方法相当，比EB高200倍，能检测到10ng的DNA条带。4）两个成分都是现用现配，可重复性好。

按照本方案提供的配制方法，共可配制试剂A和试剂B分别1000ml。

 快速核酸银染试剂盒产品组分

运输与储存

常温运输和保存即可。有效期1年。

 快速核酸银染试剂盒注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）银染主要出现在PAGE胶的表面，因此该方法更适合用于薄胶（0.5-0.75mm）的检测。

3）染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm。

4）凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。

5）PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。

6） 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是几步漂洗过程不够彻底，或染色过程温度太低。

7）较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。

8）室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。

9）染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。

10）银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。

11）影响**银染色效果的因素很多，其使用容器的材质也是一个非常重要的因素。通常玻璃平皿是最理想的银染容器，其化学性质极其稳定，几乎不与银染试剂中的任何成分发生反应，且不具有吸附染料的特性。其次是医用搪瓷盘，瓷釉为无机玻璃质材料，能耐各种浓度的无机酸(包括强氧化性酸)、有机酸、弱碱和强有机溶剂，但不耐酸、碱介质交替使用，而常规银染法就是酸碱介质交替使用，因此搪瓷盘银染效果不如玻璃平皿。塑料种类较多，如果塑料是由含氨基官能团的有机物（脲、三聚*胺或苯代三聚*胺）与醛类（主要是甲醛）化合物经缩聚反应而得，则这种塑料会在碱性溶液中与有强还原作用的甲醛发生反应，进而使甲醛消耗，减弱银离子与蛋白的结合，降低显色敏感度和显色速度。

 快速核酸银染试剂盒操作方法

1 配制试剂A（以100ml为例）

所需要配制的试剂A（即染色液）的体积跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。本方案以配制100mL试剂A为例进行详述，请根据具体凝胶大小，确定实际所需染色液用量，再按比例改变各组分用量。

以100ml试剂A为例，在一干净烧杯中加入下列组分搅拌混匀即可。试剂A需要新鲜配制。

2 配制试剂B（以100ml为例）

所需要配制的试剂B（即显色液）的体积跟PAGE胶的大小相关，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。本方案以配制100ml试剂B为例进行详述，请根据具体凝胶大小，确定实际所需试剂B用量，再按比例改变各组分用量。

以100ml 为例，在一干净烧杯中加入下列组分搅拌混匀即可。试剂B需要新鲜配制。

3 染色

1）PAGE电泳结束后，将PAGE胶转移到装有去离子水的瓷盘中，进行漂洗，2min/次，共2次。

2）将PAGE胶转移到适当体积的试剂A，使试剂A在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温染色10min。

3）倒掉试剂A，用去离子水快速漂洗2次，每次30秒。

4）将PAGE胶转移到适当体积的试剂B，使试剂B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到颜色显现，一般需要10min左右。

5）将PAGE胶置于适当背景下照相。