总SOD活力检测试剂盒II(比色法)
产品名称: 总SOD活力检测试剂盒II(比色法)
英文名称: Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II
产品编号: 50105ES60
产品价格: 0
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2023-08-17T13:40:59
使用范围: null
- 联系人 : 李自转
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Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II
总SOD活力检测试剂盒II(比色法)
产品信息
产品描述
超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)能催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2),是生物体内一种重要的抗氧化酶。
目前有多种SOD活性测定方法,其中NBT(氮蓝四唑)法和细胞色素C法都是常用的检测方法。但WST-8法更为先进,稳定性更好、灵敏度更高。其基本检测原理是:
黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase)催化产生超氧化物阴离子,该超氧化物阴离子可以与WST-8反应产生水溶性的甲H(formazan)产物,而SOD可以抑制上述反应。通过分析甲H产物OD值,可计算SOD的酶活力。
检测原理图如下:
本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等多种生物样品中的SOD活性。按照试剂盒提供使用步骤操作,1个试剂盒可供100次检测。适合用于高通量筛选研究。
产品优势
1)WST-8反应产物是稳定的水溶性产物;
2)WST-8法可以通过检测单个时间点的吸光值测定SOD活力;
3)WST-8法测定时最大抑制百分率可以接近100%;
4)不受样品中过氧化氢的干扰,本试剂盒通过添加适量过氧化氢酶等特殊方法,有效去除常规样品中过氧化氢的干扰。
产品组分
运输和保存方法
冰袋运输。 -20℃保存,有效期6个月。【注】:WST-8溶液需避光保存。
注意事项
1)待测样品可-70℃保存一个月,避免反复冻融导致SOD部分失活;
2)细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液,会干扰检测;
3)抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1.样品的制备
① 细胞样品
1000-2000g,4℃离心10min收集细胞,预冷PBS或生理盐水洗涤1-2次。预冷PBS重悬细胞并于冰浴进行匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。随后匀浆液1500g,4℃离心5min,取上清待测。
② 组织样品
动物解剖前用生理盐水(0.9% NaCl,含有0.16mg/ml肝素钠)灌流彻底清除红细胞及血块,取适量的组织样品,加入预冷的PBS于冰浴进行匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。随后匀浆液1500g,4℃离心5min,取上清待测。
③ 血浆或红细胞样品
用抗凝管收集血液,颠倒混匀。4℃,600 g离心10min,移取上清至新的1ml离心管中,适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。红细胞样品可以参考步骤① 细胞样品的制备方法,或其他不含Triton X-100等去垢剂的样品制备方法。
【注】:a. 上述样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒(Yeasen 20201)测定蛋白浓度。通常10-20μg蛋白的细胞 或组织匀浆液样品中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作参考)。每种样品准备20-100μg蛋白量通常已经足够用于后续检测。
b. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用本试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏组织10%匀浆液(组织和匀浆液的重量比为10%)上清,通常需要稀释10-100倍。
c. 准备?的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,于-80℃冻存可保存至少1个月。但建议尽量当天完成测定。注意反复冻融会导致SOD部分失活。
2. 试剂盒的准备工作
① WST-8/酶工作液的配制
按照每个反应160μl的体积配置适量的WST-8/酶工作液。均匀混合151μl SOD检测缓冲液、8μl WST-8和1μl酶溶液,即可配置成160μl WST-8/酶工作液。根据待检测样品(包括标准品)的数量,配置适量的WST-8/酶工作液。配制好的WST-8/酶工作液4℃或冰浴保存,可以在当天使用,但建议尽量现配现用。
【注】:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。
② 反应启动工作液的配制
把试剂盒中的反应启动液(40×) 融解后混匀,按照每1μl反应启动液(40×)加入39μl SOD检测缓冲液的比例进行稀释,混匀后即为反应启动工作液。根据待检测样品(包括标准品)的数量,配置适量的反应启动工作液。配制好的反应启动工作液4℃或冰浴保存, 可以在当天使用,但建议尽量现配现用。
③ (可选)SOD标准品准备
需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至以下系列浓度:200U/ml,100U/ml,50U/ml,20U/ml