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总SOD活力检测试剂盒II(比色法)

总SOD活力检测试剂盒II(比色法)

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产品名称: 总SOD活力检测试剂盒II(比色法)

英文名称: Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II

产品编号: 50105ES60

产品价格: 0

产品产地: 翌圣生物

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2023-08-17T13:40:59

使用范围: null

翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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HB161206

Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II

SOD活力检测试剂盒II(比色法)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

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价格(元)

Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II SOD活力检测试剂盒II(比色法)

50105ES60

100T

-20

1685

产品描述

超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)能催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2),是生物体内一种重要的抗氧化酶。

目前有多种SOD活性测定方法,其中NBT(氮蓝四唑)法和细胞色素C法都是常用的检测方法。但WST-8更为先进,稳定性更好、灵敏度更高。其基本检测原理是:

黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase)催化产生超氧化物阴离子,该超氧化物阴离子可以与WST-8反应产生水溶性的甲H(formazan)产物,而SOD可以抑制上述反应。通过分析甲H产物OD值,可计算SOD的酶活力。

检测原理图如下

 

本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等多种生物样品中的SOD活性。按照试剂盒提供使用步骤操作,1试剂盒可供100次检测。适合用于高通量筛选研究。

产品优势

1WST-8反应产物是稳定的水溶性产物;

2WST-8法可以通过检测单个时间点的吸光值测定SOD活力;

3WST-8法测定时最大抑制百分率可以接近100%

4)不受样品中过氧化氢的干扰,本试剂盒通过添加适量过氧化氢酶等特殊方法,有效去除常规样品中过氧化氢的干扰。

产品组分

组分编号

 组分名称

组分规格

50105-A

检测缓冲液

70 ml

50105-B

WST-8 

800 μl

50105-C

Enzyme Solution  酶溶液

100 μl

50105-D

40×Initial Solution  40×反应启动液

60 μl

运输和保存方法

冰袋运输。 -20℃保存,有效期6个月【注】:WST-8溶液需避光保存。

注意事项

1)待测样品可-70保存一个月,避免反复冻融导致SOD部分失活;

2)细胞或组织等样品制备时不能采用含有Triton X-100等去垢剂的溶液,会干扰检测;

3抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1.样品的制备

 细胞样品

1000-2000g4℃离心10min收集细胞,预冷PBS或生理盐水洗涤1-2预冷PBS重悬细胞并于冰浴进行匀浆可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器随后匀浆液1500g4离心5min,取上清待测。

 组织样品

动物解剖前用生理盐水0.9% NaCl,含有0.16mg/ml肝素钠灌流彻底清除红细胞及血块,取适量的组织样品,加入预冷的PBS冰浴进行匀浆可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器。随后匀浆液1500g4离心5min,取上清待测。

 血浆或红细胞样品

用抗凝管收集血液,颠倒混匀。4℃,600 g离心10min,移取上清至新的1ml离心管中,适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测红细胞样品可以参考步骤 细胞样品的制备方法,或其他不含Triton X-100等去垢剂的样品制备方法。

【注】:a. 上述样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒Yeasen 20201测定蛋白浓度。通常10-20μg蛋白的细胞        或组织匀浆液样品中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作参考)。每种样品准备20-100μg蛋白量通常已经足够用于后续检测。

 b. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用本试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏组织10%匀浆液(组织和匀浆液的重量比为10%)上清,通常需要稀释10-100倍。

c. 准备?的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,-80冻存可保存至少1个月。但建议尽量当天完成测定。注意反复冻融会导致SOD部分失活。

2. 试剂盒的准备工作

 WST-8/酶工作液的配制

按照每个反应160μl的体积配置适量的WST-8/酶工作液。均匀混合151μl SOD检测缓冲液、8μl WST-81μl酶溶液,即可配置成160μl WST-8/酶工作液。根据待检测样品包括标准品的数量,配置适量的WST-8/酶工作液。配制好的WST-8/酶工作液4或冰浴保存,可以在当天使用,但建议尽量现配现用。

:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

 反应启动工作液的配制

把试剂盒中的反应启动液(40×) 融解后混匀,按照每1μl反应启动液(40×)加入39μl SOD检测缓冲液的比例进行稀释,混匀后即为反应启动工作液。根据待检测样品(包括标准品)的数量,配置适量的反应启动工作液。配制好的反应启动工作液4或冰浴保存, 可以在当天使用,但建议尽量现配现用。

 (可选)SOD标准品准备

需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至下系列浓度:200U/ml100U/ml50U/ml20U/ml