M8650 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)-细胞生物学检测-试剂-生物在线
M8650  线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

M8650 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

商家询价

产品名称: M8650 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

英文名称: Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1

产品编号: M8650-100T

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三层

品牌商标: solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)

品牌:Solarbio | 货号:M8650
  • 别名 : 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)
  • 英文名称 : Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1
  • 储存条件 : -20°C干燥避光保存 ,保质期1年
  • 单位 : 盒

 

 

 

 

 

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M8650-100T Solarbio 100T 800.00元

M8650  线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)产品介绍

产品简介:

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1 )是一种以 JC-1 为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的 线粒体膜电位变化的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测。

JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体 膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒 体膜电位较低时,JC-1 不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-1 为单体,可以产生绿色荧光。这样就可以 非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极 化的比例。

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以 很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用 JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的 一个检测指标。

JC-1 单体的*大激发波长为 515nm ,*大发射波长为 529nm ;JC-1 聚合物的*大激发波长为 585nm ,*大发射波长为 590nm 。实际观察时,使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。

本试剂盒提供了 CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品,本试剂盒共可 以检测 100 个样品;对于 12 孔中的样品,本试剂盒共可以检测 200 个样品。

产品内容:

产品名称  包装
JC-1(200×) 100μ L/ 管,共 5 管
超纯水 90mL
JC-1 染色缓冲液(5 ×)8 80mL
CCCP(10mM ) 20μ L

保存条件:

-20 ℃避光保存,尽量避免反复冻融,有效期一年。 超纯水和 JC-1 染色缓冲液(5 ×)也可 4 ℃保存。

操作步骤:

1、JC-1 染色工作液的配制:

六孔板每孔所需 JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推; 对于细胞悬液每 50~100 万细胞需 0.5mL JC-1 染色工作液。取适量 JC-1 (200×),按照每 50μL JC-1(200 ×)加入 8mL 超纯水的比例稀释 JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入 2mL JC-1 染色缓冲 液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。

2、阳性对照的设置:

把试剂盒中提供的 CCCP(10mM )推荐按照 1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至 10μM , 处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常 10μM CCCP 处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经 JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关 文献资料决定。

3、对于悬浮细胞:

(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。

(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育 20 分钟。

(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的 JC-1 染色缓 冲液(1×),并放置于冰浴。

(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。

(5)用 JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~ 4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟, 沉淀细胞,弃上清。

(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分 光光度计检测或流式细胞仪分析。

4、对于贴壁细胞:

注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,可以先收集细胞,重悬后参 考悬浮细胞的检测方法。

(1)对于六孔板的一个孔,吸除培养液,根据具体实验如有必要可以用 PBS 或其它适当溶液洗涤细胞一 次,加入 1mL 细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。

(2)加入 1mL JC-1 染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中 37℃孵育 20 分钟。

(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的 JC-1 染色 缓冲液(1×),并放置于冰浴。

(4)37℃孵育结束后,吸除上清,用 JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次。

(5)加入 2mL 细胞培养液,培养液中可以含有血清和酚红。

(6)荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。

5、对于纯化的线粒体:

(1)把配制好的 JC-1 染色工作液再用 JC-1 染色缓冲液(1×)稀释 5 倍。

(2)0.9mL 5 倍稀释的 JC-1 染色工作液中加入 0.1mL 总蛋白量为 10~100 μg 纯化的线粒体。

(3)用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描(time scan),激 发波长为 485nm ,发射波长为 590nm 。如果使用荧光酶标仪,激发波长不能设置为 485nm 时,可以在 475~520nm 范围内设置激发波长。另外,也可以参考下面步骤 6 中的波长设置进行荧光检测。

(4)用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察:方法同下面的步骤 6 。

6、荧光观测和结果分析:

检测 JC-1 单体时可以把激发光设置为 490nm ,发射光设置为 530nm ;检测 JC-1 聚合物时,可以 把激发光设置为 525nm ,发射光设置为 590nm 。

 注意:此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在*大激发波长和*大发射波长。如使用荧光显微 镜观察,检测 JC-1 单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置,如观察 GFP 或 FITC 时的设置;检测 JC-1 聚合物时可以参考观察其它红色荧光,如碘化丙啶或 Cy3 时的设置。出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降, 并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。

注意事项:

(1)JC-1 (200×)在 4 ℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以 20~ 25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

(2)必须先把 JC-1(200×)用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后,才可以加入 JC-1 染色缓冲液(5×)。 不可先配制 JC-1 染色缓冲液(1×)再加入 JC-1(200×),这样 JC-1 会很难充分溶解,会严重影响后续的 检测。

(3)装载完 JC-1 后用 JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤时,使 JC-1 染色缓冲液(1×)保持 4 ℃左右,此时的 洗涤效果较好。

(4)JC-1 探针装载完并洗涤后尽量在 30 分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。

(5)请勿把 JC-1 染色缓冲液(5×)全部配制成 JC-1 染色缓冲液(1×),本试剂盒使用过程中需直接使用 JC-1 染色缓冲液(5×)。

(6)如果发现 JC-1 染色缓冲液(5×)中有沉淀,必须全部溶解后才能使用,为促进溶解可以在 37℃加热。

(7)CCCP 为线粒体电子传递链抑制剂,有毒,请注意小心防护。

(8)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

 

参考文献:

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