产品信息

背景描述

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。

腔肠素作为水母发光蛋白复合物（Aequorin）的组成成分，只有与钙离子（Ca²⁺）结合后，才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO₂和蓝色荧光（~466nm）。其具有以下几个优点：1）能检测较大范围的Ca²⁺浓度（0.1-100μM）；2）样品无自体荧光，背景荧光较低，尽管信号较荧光钙离子指示剂弱，但信噪比更高，因此具有较高灵敏度；3）Aequorin能够稳定维持在细胞内，能够进行数小时至数天Ca²⁺的监测。 

图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca²⁺依赖反应流程

腔肠素具有能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量转移到EYFP（增强的黄色荧光蛋白），发出绿光（~530nm）。通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系研究蛋白-蛋白之间的相互作用。BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量。

主要应用

1. 活体成像。

2. 报告基因检测。

3. 检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平：细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚**阴离子能够增强腔肠素在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光。

4. 高通量筛选。

5. 监测活细胞内钙离子水平。

产品描述

腔肠素n（Coelenterazine n）是粉末形式的腔肠素衍生物，它的荧光强度在所有的腔肠素衍生物中是最弱的，且对Ca²⁺反应速率也明显低于天然腔肠素。是非常有用的Ca²⁺低灵敏检测底物。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体环境下，避免接触空气。

腔肠素n溶液的配制

腔肠素n溶解特性：不溶于水。目前毒性最低的溶剂是100%乙醇，可配制浓度为0.1-1mg/ml。加入pH低于7.0的酸性缓冲液（碱性pH会快速降解底物）稀释成低浓度工作液。切忌溶于DMSO。

腔肠素n保存特性：建议溶液现配现用！体外实验，需将稀释后的工作液室温放置20-30min，方可稳定工作。该工作液可室温稳定放置3-4h，有非常微弱的信号衰减发生。不建议储存液-20℃或更低温度保存，因为其高能量的二氧环丁酮结构即使在低温的情况下也会发生降解，导致荧光强度明显变弱。短时间保存条件：-70℃避光保存于塑料管内（溶液中不含有Ca²⁺），且有惰性气体保护。

注意事项

1. 粉末最好使用惰性气体（氮气或氩气），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使存在少量空气，可能造成腔肠素n氧化失活，造成在不同试验间的量化分析结果无法比较。

2. 本品接触空气，水或者任何氧化试剂会不稳定。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1.   腔肠素及其衍生物的特性