lambda gtWES.lambdaB载体构建的基本实验步骤包括（1）目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)克隆筛选。

技术流程如下：

1、miRNAs序列分析；

2、PCR引物设计及合成；

3、PCR扩增pri-miRNA序列或者单链互补引物退火形成pre-miRNA序列；

4、将片段克隆至含有CMV强启动子的载体上；

5、lambda gtWES.lambdaB测序以确保插入序列正确性；

6、向客户提交测序结果与实验方法报告单。

基因过表达载体构建

基因过表达指细胞利用自身元件把储存在表达质粒DNA中的遗传信息转录、翻译成具有生物活性的蛋白质分子的过程，基因过表达是目前研究基因功能最常用的手段。

lambda gtWES.lambdaB可以提供以PCR为基础的各类载体构建，如细菌表达载体、酵母表达载体、动物表达载体，报告基因载体等。

●多顺反子表达(multi-cistron expression)： 通过2A、IRES、多启动子、融合表达等手段，在一个质粒里实现同时表达两个或者两个以上基因。

●上百种工具载体可选，满足不同研究需要：包括各种原核、真核表达载体、以及各种病毒载体。

●多种报告基因示踪： 绿色荧光蛋白：GFP、eGFP、emGFP、ZsGreen1、hrGFP，红色荧光蛋白：mcherry、DsRed-Express2、tdTomato，此外还有YFP等。

●可选择各种启动子： CMV、mCMV、EF1a、PGK、SV40、UBC，CAG以及各种组织特异性启动子。

●lambda gtWES.lambdaB多种亲和标签融合：His、flag、GST、c-myc、HA、MBP等等。XY90603随机引物法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY90604PCR法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY90605TdT加尾法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY131036DNA 5’末端标记试剂盒10次XY100210dNTP溶液(标记专用)0.5mLXY100920生物素标记dUTP溶液50μLXY100921地高辛标记dUTP溶液25μLXY120631Aminoally-dUTP溶液100μLXY120630Fluorescein -12- dUTP溶液25μLXY130995Cy3-dCTP溶液25μLXY130996Cy5-dCTP溶液25μLXY121122柱式探针纯化试剂盒10次XY121110超快核酸转膜试剂盒5次(A)|5次(B)XY70104核酸印迹膜染液100mLXY80915超级杂交液100mL(A)|100mL(B)XY130904超级杂交液(Oligo探针)10mLXY130905超级杂交液(芯片)10mLXY130906超级杂交液(原位杂交)10mLXY131208DNA探针变性液10mLXY100405SSC溶液，20×100mLXY100809SSPE溶液，20×100mLXY70907去离子甲酰胺100mLXY100812BLOTTO溶液100mLXY70904酵母tRNA溶液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY91104Denhardt溶液，50×100mL(A)|100mL(B)XY100604鲑鱼精DNA溶液1mLXY130908鲱鱼精DNA溶液1mLXY131207小牛胸腺DNA溶液1mLXY130810荧光尺1个XY120643硫酸葡聚糖1gXY120644聚乙二醇100gXY120674酪蛋白50gXY130907脱脂奶粉(杂交专用)50gXY120676Southern封堵液(NC专用)50mLXY120677Southern封堵液(Nylon专用)50mLXY100930**纤维素膜1张(A)|1张(B)XY120930分子杂交炉1台XY120931紫外交联仪1台XY121114非同位素探针杂交试剂盒5次(A)|5次(B)XY100847BCIP-NBT法地高辛杂交检测试剂盒5次XY100848ECL法地高辛杂交检测试剂盒5次XY131001AP标记的抗地高辛抗体10μLXY131002AP标记的抗生物素抗体10μLXY131003HRP标记的抗地高辛抗体10μLXY131004HRP标记的抗生物素抗体10μLXY130807显影定影试剂盒1套XY130808显影粉1袋XY130809定影粉1袋XY131117DNA 包被溶液100mLXY1311654× 核酸液相杂交液10mLXY121206DNA 稀释液10mL

细胞及免疫学