pCMV-Tag 2C基因工程的基本操作程序：

1、目的基因的获取

（1）目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因。

（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

2、基因表达载体的构建

（1）pCMV-Tag 2C目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DN**段之间连接形成的产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物、目的基因和目的基因连接物三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离、纯化(或筛选)。

(2)pCMV-Tag 2C用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是载体和载体连接物；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是启动子mRNA。

(4)pCMV-Tag 2C在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_EcoRⅠ和BamHⅠ。XY3073 一管式病毒RNAOUT 50次|200次

XY71001 柱式病毒RNAOUT 50次

XY80922 96孔板病毒RNAOUT(离心法) 1次|5次

XY80104 一站式柱式miRNAOUT 50次

XY80906 一站式大提柱式miRNAOUT 5次

XY80908 一站式动物mRNAOUT 25次

XY130512 一站式磁珠法动物mRNAOUT 50次

XY81108 一站式全血mRNAOUT 25次

XY81028 一站式植物mRNAOUT 25次

XY81103 一站式真菌mRNAOUT 25次

XY80817 mRNA提取试剂盒 25次

XY131231 Oligo(dT)纤维素 25mg

XY130976 Oligo(dT)再生溶液 100mL

XY130977 生物素化的Oligo(dT) 5ug

XY130521 链霉亲和素磁珠 2mL

XY3090 固相RNase清除剂 100mL|250mL

XY130983 气相RNase清除剂 120mL

XY3091 液相RNase清除剂 1.5mL

XY3110 氧钒核糖核苷复合物 10mL

XY3100 RNA长效保存液 1.5mL

XY3290 RNase抑制剂(人源) 400U|2500U

XY130699 RNase 抑制剂(小鼠源) 3000U

XY60201 非酶DNA清除剂 1.5mL

XY70801 非酶DNA清除剂-2 15次

XY90318 柱式DNA清除剂 50次

XY90802 大提柱式DNA清除剂 5次

XY90903 无RNase的DNase溶液 300U

XY90904 膜结合DNA清除试剂盒 50次