pET-44 Ek/LIC载体选择主要考虑下述3点：

【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

【2】.载体的类型：

（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。

（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。

（3）对原核表达载体应该注意3点：

①pET-44 Ek/LIC选择合适的启动子及相应的受体菌；

②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；

③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。

【3】载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。

pET-44 Ek/LIC选用质粒（最常用）做载体的4点要求：

①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；

②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。

③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；

④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。

pET-44 Ek/LIC无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。XY90603随机引物法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY90604PCR法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY90605TdT加尾法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY131036DNA 5’末端标记试剂盒10次XY100210dNTP溶液(标记专用)0.5mLXY100920生物素标记dUTP溶液50μLXY100921地高辛标记dUTP溶液25μLXY120631Aminoally-dUTP溶液100μLXY120630Fluorescein -12- dUTP溶液25μLXY130995Cy3-dCTP溶液25μLXY130996Cy5-dCTP溶液25μLXY121122柱式探针纯化试剂盒10次XY121110超快核酸转膜试剂盒5次(A)|5次(B)XY70104核酸印迹膜染液100mLXY80915超级杂交液100mL(A)|100mL(B)XY130904超级杂交液(Oligo探针)10mLXY130905超级杂交液(芯片)10mLXY130906超级杂交液(原位杂交)10mLXY131208DNA探针变性液10mLXY100405SSC溶液，20×100mLXY100809SSPE溶液，20×100mLXY70907去离子甲酰胺100mLXY100812BLOTTO溶液100mLXY70904酵母tRNA溶液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY91104Denhardt溶液，50×100mL(A)|100mL(B)XY100604鲑鱼精DNA溶液1mLXY130908鲱鱼精DNA溶液1mLXY131207小牛胸腺DNA溶液1mLXY130810荧光尺1个XY120643硫酸葡聚糖1gXY120644聚乙二醇100gXY120674酪蛋白50gXY130907脱脂奶粉(杂交专用)50gXY120676Southern封堵液(NC专用)50mLXY120677Southern封堵液(Nylon专用)50mLXY100930**纤维素膜1张(A)|1张(B)XY120930分子杂交炉1台XY120931紫外交联仪1台XY121114非同位素探针杂交试剂盒5次(A)|5次(B)XY100847BCIP-NBT法地高辛杂交检测试剂盒5次XY100848ECL法地高辛杂交检测试剂盒5次XY131001AP标记的抗地高辛抗体10μLXY131002AP标记的抗生物素抗体10μLXY131003HRP标记的抗地高辛抗体10μLXY131004HRP标记的抗生物素抗体10μLXY130807显影定影试剂盒1套XY130808显影粉1袋XY130809定影粉1袋XY131117DNA 包被溶液100mLXY1311654× 核酸液相杂交液10mLXY121206DNA 稀释液10mL

细胞及免疫学