核酸内切酶 VIII

产品及特点

大肠杆菌核酸内切酶 Ⅷ 既有 N -糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N -糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶 (AP) 位点。AP-裂解酶活性则分别在 AP 位点的 3 和 5 端切割磷酸二酯键，产生 5 磷酸和 3 磷酸末端。能被核酸内切酶 Ⅷ 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲 。尽管核酸内切酶 Ⅷ 与核酸内切酶 III 的活性相似，但核酸内切酶 Ⅷ 具有 β 和 δ 裂解酶活性，而核酸内切酶 III 只有 β 裂解酶活性。其反应示意图如下：

具体有下列特点：

1. 单细胞凝胶电泳（彗星试验），彗星试验的推荐稀释倍数，1∶104～1∶105

2. 碱洗脱

3. 碱解旋

反应条件

1X Endonuclease VIII 反应缓冲液 [10 mM Tris-HCl，75 mM NaCl，1 mMEDTA（pH 8.0 @25℃）]，37℃ 温育。

单位定义

1 单位指在 10 μl 缓冲液体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含一个 AP 位点*的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。 AP 位点的创建方法如下：37℃条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UDG)处理 10 pmol 含单一尿嘧啶碱基的34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。

Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8.0@ 25℃

热失活

75℃ 10分钟。