1、用pLUS先做一下转化，把质粒转入感受态细胞内

2、将菌液涂到LB平板上倒置、过夜培养

3、挑取单克隆菌落，打入5毫升左右的液体LB，摇床12-16小时，吸取两毫升左右菌液，做一个小提，测浓度，跑胶，4、确定提出来之后，再用剩余菌液按1:100比例加入液体LB，摇床12-16小时

5、摇床结束后，用去内毒素的中提或者大提，可以留几毫升菌液加入适量甘油制成甘油菌冻-80，提出来的pLUS就可以用于转染了。

如果想直接用甘油菌，那么只需要做第四第五步就行。

以Invitrogen的Lipofectamine 2000为例，需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

pLUS步骤如下：以24孔培养板为例：

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，pLUS轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量最好设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml完全培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，pLUS寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，最后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。XY100844PCR优化试剂盒1套XY90302氯化锰溶液，PCR级5mLXY70905明胶溶液，2%，PCR级1.5mLXY61203高GC DNA清除剂，PCR级1.5mLXY130307二氯化锰溶液，25mM，PCR级5mLXY130840硫酸镁溶液，10mM，PCR级5mLXY130841石蜡油，PCR级10mLXY80205DMSO，PCR级1.5mLXY130506海藻糖溶液，1.5M，PCR级1.5mLXY70902甜菜碱溶液，5M，PCR级1.5mLXY70909绿如蓝染料，PCR级0.1mL|1mLXY51208dNTP溶液，10 mM0.5mL(B)|5mL(B)XY131038dUTP溶液，100 mM0.4mLXY130920dITP溶液，100mM0.5mLXY120615dATP溶液，100mM0.5mLXY120617dTTP溶液，100mM0.5mLXY120619dGTP溶液，100mM0.5mLXY130917dCTP溶液，100mM0.5mLXY131139Deaza dGTP溶液，5mM0.4mLXY131140双脱氧dNTP溶液，10mM40uL×4XY131141dNTP和引物清除剂100次XY131212PCR Mix染料10mLXY60901可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂0.3mLXY130815Taq酶抗体250U|1000UXY130601DNA 修复混合液30次|150次XY70802即用型PCR试剂盒2.0100次|600次XY90805即用型PCR试剂盒3.0100次|600次XY130986即用型热启动PCR 试剂盒1.5次XY130985免DNA提取PCR试剂盒100次XY101005即用型易错PCR试剂盒100次XY90702即用型长片段PCR试剂盒20次XY90708即用型高保真PCR试剂盒1.5mL|9mLXY130605即用型多重 PCR试剂盒50次XY90408即用型荧光定量PCR试剂盒100次|600次XY130816Real-Time PCR稀释液1mlXY130817ROX参考染料，高浓度型200μlXY100931ROX参考染料，低浓度型5μgXY60906cDNA第一链合成试剂盒10次|50次XY130911miRNA cDNA第一链合成试剂盒25次XY131042miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒25次XY131005cDNA第二链合成试剂盒30次XY130308一管式双链cDNA合成试剂盒10次XY100814Oligo dT12-18引物5μgXY1004096 nt随机引物5μgXY13122710 nt随机引物5μgXY1206796nt随机引物(抗水解)100μLXY80206两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)50次XY91202双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)50次XY130609一步式RT-PCR Mix1mLXY130957免RNA提取RT-PCR试剂盒100次XY101219即用型荧光定量RT-PCR试剂盒50次XY100941通用型全基因组扩增试剂盒30次XY100938单细胞全基因组扩增试剂盒30次XY100940石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒30次XY100942单孢子全基因组扩增试剂盒30次XY100947环状DNA全基因组扩增试剂盒30次XY100203通用型LAMP试剂盒50次XY101114通用型RT-LAMP试剂盒50次XY130923LAMP扩增阳性对照50次XY130833LAMP可见光染料1mLXY131179核酸稀释液，测OD专用100mLXY131083Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒20次XY91106T7体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY91107SP6体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY91108T3体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY130694m7G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY130695m7G(5′)ppp(5′)A 帽结构类似物25ODXY130696G(5′)ppp(5′)A 帽结构类似物25ODXY130697G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY1306983′-O-Me-m7G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY70906NTP溶液，10 mM0.5mLXY120625ATP溶液，100mM0.25mLXY120626UTP溶液，100mM0.25mLXY120628GTP溶液，100mM0.25mLXY120627CTP溶液，100mM0.25mLXY130832通用型MLPA试剂盒20次XY130551单细胞RNA扩增试剂盒80次XY130803单细胞裂解液(DNA)1mLXY130804单细胞裂解液(RNA)1mLXY130805单细胞悬浮液1mLXY130806胚胎裂解液1mLXY131128动物种属鉴定PCR Mix100次XY131129植物种属鉴定PCR Mix100次XY131130真菌种属鉴定PCR Mix100次XY131131细菌种属鉴定PCR Mix100次XY30常用PCR引物100uL

基因结构和功能

XY100212 一管式点突变试剂盒 10次

XY130823 多点突变试剂盒 20次