1、用pMCSG19B (linearized)先做一下转化，把质粒转入感受态细胞内

2、将菌液涂到LB平板上倒置、过夜培养

3、挑取单克隆菌落，打入5毫升左右的液体LB，摇床12-16小时，吸取两毫升左右菌液，做一个小提，测浓度，跑胶，4、确定提出来之后，再用剩余菌液按1:100比例加入液体LB，摇床12-16小时

5、摇床结束后，用去内毒素的中提或者大提，可以留几毫升菌液加入适量甘油制成甘油菌冻-80，提出来的pMCSG19B (linearized)就可以用于转染了。

如果想直接用甘油菌，那么只需要做第四第五步就行。

以Invitrogen的Lipofectamine 2000为例，需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

pMCSG19B (linearized)步骤如下：以24孔培养板为例：

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，pMCSG19B (linearized)轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量最好设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml完全培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，pMCSG19B (linearized)寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，最后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。XY010 流感病毒N1型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY011 流感病毒N2型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY012 乙型流感病毒核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY013 丙型流感病毒核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY014 呼吸道呼吸道合胞病毒(RSV)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY015 呼吸道呼吸道合胞病毒(RSV)A亚型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY016 呼吸道呼吸道合胞病毒(RSV)B亚型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY017 人副流感病毒1型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY018 人副流感病毒2型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY019 人副流感病毒3型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY020 人副流感病毒4型核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY021 冠状病毒(HCoV)通用核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY022 冠状病毒(SARS)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY023 冠状病毒(HKU)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY024 冠状病毒(OC43)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY025 冠状病毒(NL63)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY026 冠状病毒(229E)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY027 博卡病毒(HBocaV)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY028 偏肺病毒(HMPV)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY029 腺病毒(ADV)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY030 甲型/乙型流感病毒核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY031 甲型H1N1/甲型流感病毒核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY032 H1/H3型流感病毒核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY033 H7/H9型流感病毒核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY034 呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB核酸分型双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY035 人副流感病毒1型/3型核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY036 人副流感病毒2型/4型核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY037 博卡病毒(HBocaV)/偏肺病毒(HMPV)核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48

XY038 冠状病毒/博卡病毒核酸双色荧光PCR检测试剂盒 48