1、用pMCSG49质粒先做一下转化，把质粒转入感受态细胞内

2、将菌液涂到LB平板上倒置、过夜培养

3、挑取单克隆菌落，打入5毫升左右的液体LB，摇床12-16小时，吸取两毫升左右菌液，做一个小提，测浓度，跑胶，4、确定提出来之后，再用剩余菌液按1:100比例加入液体LB，摇床12-16小时

5、摇床结束后，用去内毒素的中提或者大提，可以留几毫升菌液加入适量甘油制成甘油菌冻-80，提出来的pMCSG49质粒就可以用于转染了。

如果想直接用甘油菌，那么只需要做第四第五步就行。

以Invitrogen的Lipofectamine 2000为例，需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

pMCSG49质粒步骤如下：以24孔培养板为例：

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，pMCSG49质粒轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量最好设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml完全培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，pMCSG49质粒寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，最后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。XY031 志贺菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY032 小肠结肠炎耶尔森菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY033 弯曲菌荧光PCR检测试剂盒 48

XY034 空肠弯曲菌荧光PCR检测试剂盒 48

XY035 结肠弯曲菌荧光PCR检测试剂盒 48

XY036 副溶血性弧菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY037 副溶血性弧菌耐热直接溶血素(TDH)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY038 副溶血性弧菌不耐热溶血毒素(TLH)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY039 副溶血性弧菌毒素调控基因(TOXR)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY040 副溶血性弧菌耐热相关溶血素(TRH)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY041 霍乱弧菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY042 霍乱弧菌(O139)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY043 霍乱弧菌(O1)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY044 霍乱弧菌霍乱毒素基因(ctxA)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY045 霍乱弧菌毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY046 嗜水气单胞菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY047 类致贺邻单胞菌核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY048 沙门菌及痢疾杆菌核酸荧光PCR联合检测试剂盒 48

XY049 肠出血性大肠杆菌(EHEC O157)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY050 肠出血性大肠杆菌EHEC O157(H7)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY051 肠出血性大肠杆菌(EHEC O104)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY052 肠出血性大肠杆菌EHEC O104(H4)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY053 肠出血性大肠杆菌致贺毒素1(Stx1)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY054 肠出血性大肠杆菌致贺毒素2(Stx2)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY055 肠出血性大肠杆菌黏附抹平因子(Eae)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY056 肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸荧光PCR检测试剂盒 48

XY057 肠产毒性大肠杆菌(ETEC)核酸荧光PCR检测试剂盒 48