1、用pNTAP-C 质粒先做一下转化，把质粒转入感受态细胞内

2、将菌液涂到LB平板上倒置、过夜培养

3、挑取单克隆菌落，打入5毫升左右的液体LB，摇床12-16小时，吸取两毫升左右菌液，做一个小提，测浓度，跑胶，4、确定提出来之后，再用剩余菌液按1:100比例加入液体LB，摇床12-16小时

5、摇床结束后，用去内毒素的中提或者大提，可以留几毫升菌液加入适量甘油制成甘油菌冻-80，提出来的pNTAP-C 质粒就可以用于转染了。

如果想直接用甘油菌，那么只需要做第四第五步就行。

以Invitrogen的Lipofectamine 2000为例，需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

pNTAP-C 质粒步骤如下：以24孔培养板为例：

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，pNTAP-C 质粒轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量最好设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml完全培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，pNTAP-C 质粒寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，最后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。XY880912 大提柱式质粒 DNAOUT 5次|10次

XY881107 大提无内毒素质粒DNAOUT 5次|10次

XY880916 96孔板质粒DNAOUT(离心法 ) 1次

XY870903 一步法质粒 DNAOUT 2.0 50次|100次

XY880201 一步法无内毒素质粒DNAOUT 50次

XY871101 一步法大提质粒DNAOUT 5次

XY880917 一步法96孔板质粒DNAOUT(离心法) 1次

XY870804 一步法单菌落质粒 DNAOUT 50次

XY880932 一步法96孔板单菌落质粒DNAOUT(离心法) 1次|5次

XY861202 一步式广谱DNAOUT 10mL

XY880930 微量样品核酸提取试剂盒 50次|200次

XY8121001 液体样品DNAOUT 50次

XY860607 液相内毒素清除剂 100次|500次

XY860608 固相内毒素清除剂 100g|500g

XY8130501 柱式内毒素清除剂 1.5mL

XY8130419 内毒素清除专用亲和介质 5mL|50mL

XY8120415 终点显色法内毒素定量试剂盒 32次

XY8130504 凝胶法内毒素半定量试剂盒 10×0.1mL

XY851203 非酶RNA清除剂1.0 1.5mL

XY860912 非酶RNA清除剂2.0 1.5mL

XY860801 柱式腐殖酸清除剂 30次|100次

XY8111008 非酶多糖清除剂(DNA专用) 50次

XY860804 PCR抑制物清除剂 1mL

XY860911 硅胶膜离心吸附柱系列(小提) 50套

XY890303 硅胶膜DNA离心吸附柱(大提) 1套

XY860606 硅胶膜离心吸附柱再生液 500次

XY8100307 酸洗玻璃珠系列 10g

XY8130514 硅基磁珠 2mL

XY8130515 氨基磁珠 2mL

XY8130516 羧基磁珠 2mL

XY8130517 环氧基磁珠 2mL