蔗糖酶测定试剂盒产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存，用时加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
试剂三：液体 4mL×1 瓶，常温保存；
    标准品：粉剂×1 支，4℃保存，用时加入1mL蒸馏水充分溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
产品说明：
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
本试剂盒采用3.5－二**水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5－二**水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：
蔗糖酶测定试剂盒
一、 样品测定的准备：
1．样品的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2．标准品的制备：
将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。
二、 加样表和测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）
对照管
测定管
标准管
试剂一
15
15
15
蒸馏水
15
 
 
样本
30
30
30
试剂二
 
15
15
置于 25℃准确水浴 10min
试剂三
30
30
30
混匀， 100℃水浴 5min 左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温
蒸馏水
210
210
210
混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中测定各管540nm 吸光值，ΔA=A 测定-A对照，每个测定管需设一个对照管。
标准曲线的建立：以标准品的浓度为x轴，540nm下的吸光度(A标准管-A对照管)为y轴，绘制标准曲线。
 
三、蔗糖酶测定试剂盒蔗糖酶活力计算：
1、 根据标准曲线，将∆A（y）带入公式中计算出x值（mg/mL）。
2、 按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=(1000×x×V1）÷(V1×Cpr)÷T=100×x÷Cpr
3、 按样本鲜重计算
单位定义：每g 组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/g 鲜重)= (1000×x×V1）÷(V1×W)÷T=100×x÷W
1000：1mg/mL=1000μg/mL； V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。


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