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谷氨酸含量测定试剂盒 微量法

谷氨酸含量测定试剂盒 微量法

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产品名称: 谷氨酸含量测定试剂盒 微量法

英文名称: Micro Glutamic Acid(Glu) Content Assay Kit

产品编号: BC1585

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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产品内容:

试剂一:液体120mL×1瓶,4保存;

试剂二:液体2mL ×1瓶,4保存;

试剂三:粉剂×1瓶,-20保存,临用前加入20mL试剂一

试剂四:粉剂×1支,-20保存,临用前加入1.5mL 试剂二

标准品:液体0.5mL×1支,4保存。10umol/mL 谷氨酸标准品。

产品说明:

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADHNH4+,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿/96UV板、研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、谷氨酸提取

细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每1000万细菌或细胞加入1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

称取约0.1g组织,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,10000 rpm,常温离心10min,取上清待测。

二、测定步骤

1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、 标准溶液的制备

将标准品分别稀释为0.6250.3130.1560.0780.039μmol/mL的标准溶液。

3、 在有盖EP管中加入下列试剂:

1)标准管:在石英比色皿/96UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm20s时的吸光值为A15min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1

2)测定管:在石英比色皿/96UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm20s时的吸光值为A15min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1

三、谷氨酸含量计算

1、 标准曲线的绘制:

以谷氨酸含量(μmol/mL)为x轴,标准管∆Ay轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值。

2、氨基酸含量计算:

1)按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量(μmol/mg prot=x×V样本÷Cpr×V样本)=x÷Cpr

2)按照样品质量计算

谷氨酸含量(μmol/g鲜重)=x×V样本÷W÷V样总×V样本)=x÷W

3)按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷1000÷V样总×V样本)=0.001x

V样总:加入提取液体积,1mLV样本:加入的样本体积,0.2mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量,g1000:细菌或细胞总数,1000万。

注意事项:

为提高检测灵敏度,测定管的吸光值应小于1∆A小于0.4,若大于此值则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定。

 相关文献:

《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,Yanyan Li,Muhammad Ali Abid,Muhammad Askari,Peilin Wang,Yuan Wang,Guoqing Sun,Yongping Cai,Shou-Yi Chen,Yi Lin,Rui Zhang,Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影响因子:3.712 PMID: