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中性蛋白酶测定试剂盒 微量法

中性蛋白酶测定试剂盒 微量法

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产品名称: 中性蛋白酶测定试剂盒 微量法

英文名称: Micro Neutral Proteinase Assay Kit

产品编号: BC2295

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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产品内容

提取液:液体55mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入4mL提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。

试剂三:液体20ml×1瓶, 4℃保存。

试剂四:液体4mL×1瓶,4℃保存。

标准品:液体1mL×1支,0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。

产品说明

NP在一定的温度和中性pH条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。

中性条件下,NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。

试验所需自备仪器和样品

研钵、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

称约0.1g组织,加入1mL提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测或直接称取0.1g酶制品,加入1mL提取液,置冰上待测。

二、测定:

1.分光光度计预热30min以上,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。

2.试剂、试剂和试剂置于30水浴保温30min以上。

3.样本测定(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)

试剂名称(μL

对照管

测定管

空白管

标准管

粗酶液

20

20

 

 

试剂一

40

 

试剂二

 

40

混匀后30℃水浴保温10min

试剂一

 

40

试剂二

40

 

混匀后10000rpm 4℃离心10min,取上清

上清

40

40

 

 

蒸馏水

 

 

40

 

标准品

 

 

 

40

试剂三

200

200

200

200

试剂四

40

40

40

40

混匀后30℃水浴保温20min

 

1mL1mL玻璃比色皿中,在680nm测定光吸收,分别记为A对照管A测定管、A空白管、A标准管

三、性蛋白酶活性计算:

1)按蛋白浓度计算

NP活性单位U定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生mol酪氨酸。

NP活性(U/mg prot

=C标准品×A测定管-A对照管÷A标准管-A空白管)×V1÷Cpr×V2÷T

=0.125×A测定管-A对照管÷A标准管-A空白管)÷Cpr

2)按样本鲜重计算

AP活性单位(U)定义:30每克样品每分钟催化水解产生1 μ mol酪氨酸。

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