NAD激酶测定试剂盒北京索莱宝科技有限公司

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性能参数

产品名称: NAD激酶测定试剂盒
英文名称: NAD Kinase (NADK) Assay Kit
产品货号: BC1030
产品规格: 50管/48样
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
产品商标: Solarbio
价    格: 1080元
保存与运输: 4℃保存或-20℃保存;
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/9/11 8:35:00
浏览人数:61
诚信指数:1275点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司
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北京市通州区马驹桥镇联东U谷景盛南四街15号85A三层
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联系人:
郭倩
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产品详细描述

 产品内容:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;

试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存。

 

产品说明:

NADK(EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是目前所发现的生物体 内唯一能够催化 NAD+***酸化生成 NADP+的酶,可催化 NAD(H)以 ATP 或无机多聚***酸[poly(P)] 作为***酰基供体进行***酸化反应,生成 NADP(H)。因此,NAD 激酶在合成 NADP(H)以及调节 NAD(H)与 NADP(H)的平衡上具有重要作用。 NADK 催化 NAD+***酸化生成 NADP+,NADP+可被 6-***酸葡萄糖脱氢酶还原为 NADPH;在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。可反应出 NADK 活性的大小。

自备仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

 

操作步骤: 

一、粗酶液提取: 

1、 细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声 波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min, 取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、 血清(浆)样品:直接检测。

 

二、测定步骤和加样表:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、将试剂一和试剂二 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 15min 以上。

3、工作液一的配制:在试剂三中加入 12mL 试剂一,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保 存,禁止反复冻融。 工作液二的配制:在试剂四中加入 12mL 试剂一,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

4、加样表

试剂名称(μL)

测定孔

对照孔

样本

100

100

工作液一

400

 

试剂一

 

400

充分混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 15min,立即煮沸 2min (盖紧,防止水分散失)冰浴冷却,10000g,25℃离心 10min,取上清

上清液

200

200

工作液二

800

800

加完试剂混匀,室温静置 15min,340nm 下测定吸光值,ΔA=A 测定-A 对照。

 

三、NADK 活性计算:

1、 血清(浆)NADK 活性

单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟生成 1nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。 NADK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷V 样÷T =53.59×ΔA

2、 组织、细菌或细胞 NADK 活性

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

NADK(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(V 样×Cpr)÷T =53.59×ΔA÷Cpr (2) 按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织每分钟生成 1nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

NADK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(W× V 样÷V 样总)÷T =53.59×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。 NADK(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(500×V 样÷V 样总)÷T =0.107×ΔA V 反总:反应体系总体积,5×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色 皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 ml;V 样总:加入提取液体积,1 ml;T:反应时间,15 min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

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