产品内容：

试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入蒸馏水3.5 mL充分震荡溶解。

试剂四：液体16mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入30mL蒸馏水，充分震荡溶解后，缓缓加入1.0 mL浓硫酸（自备），边加边搅拌。

标准品：液体1mL×1支，4℃保存。1μmol/mL 磷标准溶液。

产品说明：

GCL （glutamate cysteine ligase）是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。

在ATP和Mg²⁺存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

二、GCL测定操作

1. 分光光度计预热30min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。

2. 将标准液稀释10倍，即稀释成0.1μmol/mL 磷标准溶液

3. 加样表：