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脂肪酶测定试剂盒

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产品名称: 脂肪酶测定试剂盒

英文名称: Lipase(LPS) Assay Kit

产品编号: BC2340

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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产品内容

试剂一:液体80mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,室温保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。

标准品:0.06mL×1。临用前加入1.5 mL无水乙醇,充分溶解配制成125 μmol/mL的油酸标准溶液,4保存。用前注意解冻溶解。

 

产品说明

LPS又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。

 

自备仪器和用品:

    研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:   

组织样品:称取约0.1g样品,加试剂一1.0 mL充分研磨,于4℃15000rpm离心30min,取上清液待测。

血清样品:直接检测。

二、测定步骤:

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至710nm甲苯调零。

2、 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3、 标准溶液的稀释:将125 μmol/mL的油酸标准溶液稀释为12562.531.2515.6257.81253.9 μmol/mL的标准溶液待测。

4、 操作表:

mL

空白管

测定管

标准管

试剂一

0.375

0.375

0.375

试剂二

0.125

0.125

0.125

反复震荡混匀

蒸馏水

0.2

 

 

上清液/血清

 

0.2

 

标准溶液

 

 

0.2

迅速震荡混匀后置于37℃水浴准确反应10 min

甲苯

1

1

1

反复震荡混匀后,室温4000rpm离心10 min

取出离心管,小心吸取上层溶液0.9 mL,加入另一2 mL塑料离心管中,按下表操作:

加入试剂(mL

空白管

测定管

标准管

试剂三

0.225

0.225

0.225

反复震荡混匀;室温4000rpm离心10 min,小心吸取上层溶液800 μL,加入1mL玻璃比色皿,于710nm处测定吸光值。记为A空白管,A测定管,A标准管,计算ΔA测定= A测定管-A空白管,ΔA标准= A标准管-A空白管

三、LPS活性计算

1、 标准曲线的绘制:以油酸标准溶液浓度为横坐标,ΔA标准为纵坐标,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程,得到xμmol/mL

2、 酶活计算:

1)按蛋白浓度计算:

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mg prot) =x×V÷Cpr×V) ÷T= 0.1×x÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/g 鲜重) =x×V÷W×V÷V) ÷T= 0.1×x÷W

3)按血清计算:

活性单位定义:37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x

V样:加入反应体系中上清液体积,0.2 mLCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;T:催化反应时间,10 minW:样本鲜重,gV提:提取液体积,1mL

注意事项:

1、甲苯有毒,实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

3当吸光度大于1时,建议将样本稀释后测量。

 

 

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