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植物脱氢酶测定试剂盒

植物脱氢酶测定试剂盒

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产品名称: 植物脱氢酶测定试剂盒

英文名称: Plant Dehydrogenase (PDHA)Assay Kit

产品编号: BC3120

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

北京索莱宝科技有限公司
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产品内容:

试剂一:粉剂×2瓶。使用前加少量水溶解,定容至30mL,避光、4℃保存(尽量现配现用)。

试剂二:液体100mL×14℃保存。

试剂三:乙酸乙酯,自备。

产品说明:

生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。

受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲替(TriphenylFormazone,即TFF)呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得植物脱氢酶活性。

自备实验用品及仪器

 台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水、乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。

 

操作步骤:

一、样品前处理:

称取0.1g的植物组织,用双蒸水清洗3-4次,用滤纸吸干水分,备用。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上,调节波长至485nm乙酸乙酯调零。

2、 操作表:取5mLEP管依次加入

 

对照管

测定管

样品(g

0.1

0.1

试剂一(mL

 

1

试剂二(mL

2

1

充分混匀,37℃,暗培养3h,取出后立即冰浴5min,去滤液,尽量用滤纸吸干样品,置于研钵/匀浆器中。

试剂三(mL

1

1

充分研磨(建议在通风橱操作)后全部移至离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三定容至2mL10000rpm/min4℃,离心5min,取上清,测定485nm下的吸光值。计算ΔA=A测定-A对照。

 

三、脱氢酶活性计算:

酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样品使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。

脱氢酶活性(U/g/h=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W

T:反应时间,3hW:样品鲜重,g

注意事项

1. 配制好的试剂一避光保存于4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

2. 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。

3. 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。

如果测定出来的吸光值较大,需把样品适当稀释再进行测定,注意计算公式乘以稀释倍数。