Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit上海前尘生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
英文名称:  Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品货号: 11119ES60
产品规格: 100T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 755元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃保存。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/8/16 11:29:00
浏览人数:56
诚信指数:826点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

11119ES60

100 T

-20℃

755.00

产品描述

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达50℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kbcDNA

试剂盒中包含由总RNAmRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6oligo (dT)18,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11119ES60 (100 T)

11119-A

RNase free ddH2O

2×1 mL

11119-B

5×HifairTM Ⅱ Buffer

400 μL

11119-C

HifairTM Ⅱ Enzyme Mix

200 μL

11119-D

dNTP10 mM

100 μL

11119-E

Oligo (dT)18 (50 μM)

100 μL

11119-F

Random Primers N6 (50 μM)

100 μL

】:HifairTM Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

注意事项

1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作


第一链cDNA合成操作步骤

1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

RNase free ddH2O

To 20 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA:1 ng-500 ng

5×HifairTM Ⅱ Buffer

4 μL

dNTP10 mM

1 μL

Random Primers N6 (50 μM)

1 μL

or Oligo (dT)18 (50 μM)

or 1 μL

HifairTM Ⅱ Enzyme Mix

2 μL

【注】:为了提高反转录的效率,推荐将RNAH2O、反转录引物在65保温5 min 后,冰上迅速冷却。然后再加入反转录酶。

2. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

30-60 min

85℃

5 min

】:1荧光定量实验可以只使用Random Primers N6;也可以1:1Oligo (dT)18混合使用,效果更好。

2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50℃

3)逆转录产物可以-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

引物选择

1 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA

2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。

3Random Primers N6适用性较广,mRNArRNAtRNAsmall RNALncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。

4使用Random primers N6,进行2 kb以下的cDNA合成时,Random primers N6的使用量为 1-2 μL2 kb 以上的cDNA合成时,Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL

 

 

HB180306

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