Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit上海前尘生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
英文名称:  Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品货号: 11119ES60
产品规格: 100T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 755元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃保存。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/2/12 13:18:00
浏览人数:2
诚信指数:801点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海前尘生物科技有限公司
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产品详细描述

产品信息

产品名称

产品编号

规格

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价格(元)

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit

11119ES60

100 T

-20℃

755.00

产品描述

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达50℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kbcDNA

试剂盒中包含由总RNAmRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random Primersoligo (dT)18,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

产品组分

编号

产品编号/规格

11119ES60 (100 T)

11119-A

RNase free ddH2O

2×1.2 mL

11119-B

5×HifairTM Ⅱ Buffer

2×400 μL

11119-C

HifairTM Ⅱ Enzyme Mix

2×200 μL

11119-D

Oligo (dT)18 (50 μM)

200 μL

11119-E

Random Primers (50 ng/μL)

200 μL

】:15×HifairTM Ⅱ Buffer包含dNTP

2HifairTM Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

引物选择

1. 若后续为PCR实验

1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA

2)基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下,用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时,可改用Oligo (dT)18Random Primers重新进行逆转录。

3Random Primers特异性较低,所有RNA,包括mRNArRNAtRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高,或者模板为原核生物来源,且使用Oligo (dT)18或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时,可使用Random Primers作为引物。

2. 若后续为qPCR实验

建议将Oligo (dT)18Random Primers混合使用,可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成,有助于提高定量结果的重复性。


第一链cDNA合成操作步骤

一、若后续为PCR实验

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 14 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 ng/μL)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA:1 ng-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

14 μL

5×HifairTM Ⅱ Buffer

4 μL

HifairTM Ⅱ Enzyme Mix

2 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

30-60 min

85℃

5 min

】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50℃

二、若后续为qPCR实验

1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 20 μL

5×HifairTM Ⅱ Buffer

4 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

1 μL

Random Primers (50 ng/μL)

1 μL

HifairTM Ⅱ Enzyme Mix

2 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA:1 ng-500 ng

2. 逆转录程序设置

温度

时间,

25℃

5 min

42℃

30-60 min

85℃

5 min

】:逆转录温度:推荐使用42℃。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50℃

※ 逆转录产物可立即用于后续PCRqPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

注意事项

1)所有操作均应在冰上进行,且操作过程应避免RNase污染;

2) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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