过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒-常用生化试剂-试剂-生物在线
过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒

过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒

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产品名称: 过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒

英文名称: Micro Hydrogen Peroxide(H2O2) Assay Kit

产品编号: BC3590

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

品牌商标: solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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产品内容: 

试剂一:丙酮 100mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 6mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:液体 1mL×1 支,4℃保存,1mmol/mLH2O2标准液。

 

产品说明: 

H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化产生,由 CAT 和 POD 等催 化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或 间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体; 另一方面 H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在 415nm 有特征吸收。

 

需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、丙酮、浓盐 酸、研钵和冰。

 

操作步骤: 

一、H2O2提取:

1、细菌或细胞样品的制备: 收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声 波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g4℃离心 10min,取上清, 置冰上待测。

2. 组织样品的制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆;8000g4℃离心 10min,取上清,置冰上待 测。

3、血清(浆)样品:按照每 100μL 血清(浆)加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀;8000g4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

注意事项:

1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。

2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。

 

二、测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 415nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二、三和四 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

3、如果用 96 孔板将则用丙酮将 1mmol/mL 标准液稀释为 2μmol/mL 的标准溶液,用微量玻璃比色 则用丙酮将 1mmol/mL 标准液稀释为 1μmol/mL 的标准溶液。

4、在 EP 管中按顺序加入下列试剂 试剂名称(μL)

试剂名称(μL)

测定管

标准管

对照管

样本

250

 

 

标准溶液

 

250

 

试剂一

 

 

250

试剂二

25

25

25

试剂三

50

50

50

4000g,常温离心 10min,弃上清,留沉淀

试剂四

250

250

250

加入试剂四溶解沉淀后(可先用丙酮清洗 3-5 次来洗去植物色素),室温静置 5min,取 200μL 转移至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 415nm 处吸光值。对照管只要做一次即可。计算A 测定=A 测定管-A 对照管,A 标准=A 标准管-A 对照管。

 

三、H2O2含量计算: 

1、按照细菌、细胞数量计算: H2O2含量(μmol/104cell)=A 测定÷(A 标准÷C 标液)×V 样本÷(500×V 样本÷V 提取) =0.004×A 测定÷A 标准。

2、按组织鲜重计算: H2O2含量(μmol/g 鲜重)=A 测定÷(A 标准÷C 标液)×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W) =2×A 测定÷A 标准÷W。

3、按照蛋白浓度计算: H2O2含量(μmol/mgprot)=A 测定÷(A 标准÷C 标液)×V 样本÷(Cpr×V 样本) =2×A 测定÷A 标准÷Cpr。

4、按血清(浆)体积计算: H2O2含量(μmol/mL)=A 测定÷(A 标准÷C 标液)×10 =20×A 测定÷A 标准。 500:细胞或细菌总数,万个;C 标液:H2O2标准溶液浓度,2μmol/mL;V 样本:加入的样本 体积,0.25mL;W:组织鲜重,g;V 提取:提取过程中所用体积,1mL;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL; 10:血清稀释倍数,[0.1mL 血清(浆)+0.9mL 试剂一]÷0.1mL 血清(浆)=10。

 

注意:如果用微量玻璃比色皿(光径 d=1cm)将 1mmol/mL 标准液稀释为 1μmol/mL 的标准溶液。 计算公式亦作改变。

相关文献:

《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,Yanyan Li,Peilin Wang,Yuan Wang,Guoqing Sun,Yongping Cai,Shou-Yi Chen,Yi Lin,Rui Zhang,Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影响因子:3.712 PMID:
《The Combination of piR-823 and Eukaryotic Initiation Factor 3 B (EIF3B) Activates Hepatic Stellate Cells via Upregulating TGF-β1 in Liver Fibrogenesis》 作者:Xuechan Tang,Xiaoli Xie,Xin Wang, Yan Wang,Xiaoyu Jiang, and Huiqing Jiang 期刊:International Medical Journal of Experimental 影响因子:1.42 PMID:30556540
《Physiological and transcriptomic analysis revealed the involvement of crucial factors in heat stress response of Rhododendron hainanense》 作者:Ying Zhao,Wengang Yu,Xiangyu Hu,Youhai Shi,Yu Liu,Yunfang Zhong,Peng Wang,Shuya Deng,Jun Niu,Xudong Yu 期刊:Gene 影响因子:2.638 PMID:29604462
《Heterologous Expression of Salvia miltiorrhiza MicroRNA408 Enhances Tolerance to Salt Stress in Nicotiana benthamiana》 作者: Xiaorong Guo, Junfeng Niu * and Xiaoyan Cao  期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30544912
《Decreasing fructose 1,6-bisphosphate aldolase activity reduces plant growth and tolerance to chilling stress in tomato seedlings》 作者:Bingbing Cai, Qiang Li, Fengjiao Liu, Huangai Bi and Xizhen Ai 期刊:Physiologia Plantarum 影响因子:3 PMID:29230823