Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物组织直接PCR试剂盒上海前尘生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物组织直接PCR试剂盒
英文名称: Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物组织直接PCR试剂盒
产品货号: 10187ES50
产品规格: 50 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 245.00元
保存与运输: 冰袋运输。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/11/23 10:19:00
浏览人数:5
诚信指数:832点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

  

 

 

 

Plant Tissue PCR Kit (With Dye)  

植物组织直接PCR试剂盒

 

Cat No. 10187

 

产品说明书

 

 

 

本产品仅作科研用途!


产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Plant Tissue PCR Kit  (With Dye)

10187ES50

50 T

245.00

Plant Tissue PCR Kit  (With Dye)

10187ES70

200 T

565.00

产品描述

植物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等,即释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外,样品使用少,低至1 mg植物叶片即可进行实验。

本试剂盒中提供的 Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化操作过程,降低污染几率。

该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。

产品组分

类别

编号

组分

产品编号/规格

储存

10187ES5050 T

10187ES70200 T

Part I

10187-A

Buffer P1

3 mL

10 mL

室温或4

10187-B

Buffer P2

3 mL

10 mL

4

Part II

10187-C

Plant Master Mixa

500 μL

1 mL×2  

-20

aPlant Master Mix包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等同时包含电泳Loading Buffer, PCR完成之后可直接电泳。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

1. 试剂10187-ABuffer P1在常温干燥条件下,可保存12个月,如需保存更长时间可置于4低温保存,易出现沉淀,可平衡至室温或37℃水浴10 min,待沉淀溶解后,混匀使用。

2. 试剂10187-BBuffer P2】,中和裂解产物,使其不影响后续 PCR 反应。保存条件与Buffer P1一样

3. 试剂10187-C Plant Master Mix-20℃保存,避免反复冻融。如果环境温度过高,2× Plant Master Mix 可能会变浑浊,可置于冰上放置1-2 min,待溶液澄清,上下颠倒混匀3-5次后再使用。


 


操作方法

本试剂盒根据不同实验需求提供了两种操作方法。直接法仅需要将一小片植物组织加入PCR反应体系即可;裂解法则是将少量含有植物组织的裂解产物加入PCR反应体系。其中,裂解法适合目的片段较长,扩增难度较大,以及需要对同一样本进行多次PCR扩增的实验。

裂解法

1. 3-5 mg叶片(直径5-7 mm)组织,置于200 μL1.5 mL离心管中。

】:切勿加入过量叶片组织,以便酶解反应顺利进行。

2. 在离心管中加入50 μL Buffer P1,确保裂解液能够完全浸没叶片组织。

3. 盖好离心管盖95处理10 min

】:加热后,若管壁上液体较多,可进行短暂瞬时离心。

4. 加入50 μL Buffer P2,用微量移液器吹打或者涡旋混匀。

5. 所得裂解液可4℃保存(5天)-20长期保存或直接用于PCR扩增。

直接法

1. 200 μL离心管中加入相应的Plant Master Mix,再添加对应的引物,并用ddH2O使其稀释1×(PCR体系配置见下表)

2. 剪取1-2 mg叶片碎块(直径2-3 mm)加入配置好的1×PCR反应体系。

】:确保叶片碎块完全被PCR反应液浸没,切勿加入过量组织叶片。

3. 根据优化好的PCR条件(退火温度等)进行PCR反应。

4. 琼脂糖凝胶电泳检测结果。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

组分

体积(μL

体积(μL

终浓度

Plant Master Mix

10

25

Forward Primer (10 μM)

0.5

1

0.2-0.25 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.5

1

0.2-0.25 μM

裂解产物(DNA模板) 

4

10

-

ddH2O

To 20

To 50

-

】:各组分使用前应充分混匀

a模板使用量:建议10-20%总体系。避免超过总体系的30%

b引物终浓度0.2-0.25 μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

c反应体系:推荐使用20 μL50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性

d体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。

e对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

 

 

 

 

 

 

PCR反应鉴定——PCR反应条件

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

94

5 min

1

变性

94

10 sec

30-40

退火

50-65

20 sec

延伸

72

30 sec/kb

终延伸

72

5 min

1

【注】:a退火温度:请参考引物的理论 Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

b延伸时间需要根据片段的长度来确定,对于1 kb以内的DNA片段,建议延长时间为30 sec

注意事项

1. 本试剂盒只适合于多糖多酚含量低的植物叶片样本,如小麦、水稻、烟草、玉米、大豆、油菜等。不适合多糖多酚含量高的植物样本。

2. 建议使用新鲜采取的叶片组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜若为成熟的叶片,避免使用叶片主脉部位组织。

3. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率最佳。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

常见问题与解决方法

常见问题

可能原因

解决方法

阳性对照、待测样本均无条带

PCR反应体系或反应条件不合适。

使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

PCR试剂保存不当失去活性。

2× PCR Mix应保存于-20,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4短时间存放。

引物设计问题。

尝试重新设计引物进行检查。

阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。

叶片中多糖多酚含量较高,裂解混合液呈棕黄色甚至棕红色。

本试剂盒不适合多分多糖含量较高的样品。

裂解液、中和液加入比例不当,裂解混合液影响PCR体系的pH值。

正常条件下,中和后的裂解混合液的 pH 应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照1:1的量进行中和)

样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

裂解混合液液可在4℃保存5天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR

模板加入量不适合。

在反应体系5-20%范围内优化模板加入量。

PCR循环数不足。

适当增加PCR的循环数,推荐35-40循环为佳。因模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。

非特异性扩增

PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。

增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。

PCR引物错配。

重新设计PCR引物。

配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。

PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。

阴性对照出现目的条带

操作工具或试剂污染。

实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

样本间交叉污染。

每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次**钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

 

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