Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set2;12612ES-文库及构建-试剂-生物在线
Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set2;12612ES

Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set2;12612ES

商家询价

产品名称: Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set2;12612ES

英文名称: Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set2

产品编号: 12612ES02

产品价格: 0

产品产地: Yeasen

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2023-08-17T13:40:59

使用范围: null

翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set1

12611ES02

48×2 T

1493.00

Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina® Set2

12612ES02

48×2 T

1493.00

产品描述

Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒,共分为2Set,每个Set包含48Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96Index Primer适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12611ES02

PE Adapter

336 μL

Universal Primer

240 μL

Index Primer 1-48

5 μL each

12612ES02

PE Adapter

336 μL

Universal Primer

240 μL

Index Primer 49-96

5 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

注意事项

1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3. 本试剂盒每个Set包含48Index Primer,每种Index Primer可以构建2DNA文库,每个Set可以构建96DNA文库。

4. 切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃

5. 使用Hieff NGS® 96 Single Index Primers Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:


6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。

接头连接(Adapter Ligation):

在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头,即Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;

1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

推荐Adapter(15 μM)使用量

400 ng

30:1

3.5 μL

300 ng

40:1

3.5 μL

200 ng

60:1

3.5 μL

100 ng

100:1

3.0 μL

50 ng

100:1

1.5 μL

【注】:Input DNA 摩尔数(pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度(bp]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

3. 配制表2所示反应体系;

2. Adapter Ligation反应体系

名称

体积(μL

dA-tailed DNA

60

Ligation Enhancer

30*

Quick T4 DNA Ligase

5

PE Adapter

x**

ddH2O

5-x

【注】:*Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度(Cat#12611Cat#12612Cat#12613Cat#12614)与常规商业化试剂盒一致,皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示,计算接头用量

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

5. PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应:

3. Adapter Ligation反应程序

温度

时间

热盖

Off

20°C

15 min

4°C

Hold

【注】:Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化(Post Ligation Clean Up

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的AdapterAdapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。

文库扩增(Library Amplification

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系;

4. PCR扩增反应体系

名称

体积(μL

2× Super Canace®High-Fidelity Mix

25

Universal Primer

2.5

Index Primer

2.5

Adapter Ligated DNA

20

【注】:文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒(Cat#12611Cat#12612Cat#12613Cat#12614)。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

4. PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增

5. PCR扩增反应程序

温度

时间

循环数

98°C

1 min

1