2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液
英文名称: 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液
产品货号: 10149ES01
产品规格: 100 μL
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 93.00 元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/11/24 8:54:00
浏览人数:45
诚信指数:900点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

价格(元)

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

10149ES01

100 μL

93.00

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

10149ES03

1 mL

553.00

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

10149ES08

5×1 mL

1453.00

产品描述

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液是即用型预混合溶液,包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA PolymerasedNTP以及优化的缓冲体系。预混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达10 kb,该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可,并可以通过两步法的程序进行扩增,简化了实验步骤,节省了时间。本产品中不含染料,PCR产物需加入Loading buffer后进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。

质量控制

核酸外切酶残留检测:20 μL本品和0.6 μg λDNA -Hind Ⅲ37℃下孵育4 hDNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测:20 μL本品和1 μg λDNA37℃温育4 hDNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入25 μL本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


推荐PCR反应体系(冰上配制)

组分

体积

终浓度

ddH2O

to 50 μL

-

DNA模板

适量

-

Primer正向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Primer反向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix

25 μL

【注】: 1聚合酶终浓度预混液含有1 U/50 μL聚合酶

2引物PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM推荐0.5 μM

3Mg2+dNTP终浓度预混液含有1.5 mM Mg2+200 μMdNTP

4不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

模板种类

扩增片段1 kb-10 kb

基因组DNA

50 ng-200 ng

质粒或病毒DNA

10 pg-20 ng

cDNA

1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。

两步法程序(优先推荐):                           三步法程序(常规程序):

循环步骤

温度

时间

循环数

 

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

3 min

1

 

预变性

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

 

变性

98℃

10 sec

30-35

延伸

68℃

30 sec/kb

 

退火

60℃

20 sec

终延伸

72℃

5 min

1

 

延伸

72℃

30 sec/kb

 

 

 

 

 

终延伸

72℃

5 min

1

梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序):           *不同扩增程序下的特点:

步骤

温度

时间

循环数

 

程序类型

两步法

三步法

梯度退火

预变性

98℃

3 min

1

 

速度

最快

中等

变性

98℃

10 sec

15,每个循环降低1℃

 

特异性

中等

梯度退火

70-55℃

20 sec

 

PCR产量

中等

最高

中等

延伸

72℃

30 sec/kb

 

检出率

中等

变性

98℃

10 sec

20

 

 

正常退火

55℃

20 sec

 

 

延伸

72℃

30 sec/kb

 

 

终延伸

72℃

5 min

1

 

 

【注】:1预变性温度和时间:推荐温度:98℃,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min

2退火温度和时间:推荐温度:60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3延伸温度和时间:推荐温度:72℃。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb

4扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

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产品名称

货号

规格

价格(元)

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES60/76/80

100/500/1000 U

683/2383/4583

零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT

10909ES20

20 T

625

零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)

10910ES20

20 T

625

一步法快速克隆试剂盒HOT

10911ES25/62

25/5×25 T

655/2455

多片段一步法快速克隆试剂盒HOT

10912ES10/50

10/5×10 T

457/1967

定点突变试剂盒HOT

11003ES10

10 T

720

多点突变试剂盒HOT

11004ES10

10 T

1228

HB190129

 

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