BL21(DE3) 感受态细胞 BL21(DE3) Chemically Competent Cell

产品规格: BL21（DE3） 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F - ompT hsdSB(rB - mB - ) gal dcm(DE3)  High5TM系列 BL21（DE3）感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7 启动子的表达载 体(如 pET 系列)的基因。 λ噬菌体 DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶，该区整合于 BL21 的染色体上，所以称为 BL21(DE3)。可 同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达。High5TM 系列 BL21（DE3） 感受态细胞由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化效率达 107cfu/μg。 1. 取 100μl 冰上融化的 BL21（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1.  感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。