异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG北京索莱宝科技有限公司

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性能参数

产品名称: 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG
英文名称:  IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
产品货号: I8070
产品规格: 5g
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
产品商标: Solarbio
价    格: 180元
保存与运输: 2-8℃
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/10/10 16:19:00
浏览人数:5
诚信指数:1287点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司
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产品详细描述




异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG

品牌:Solarbio | 货号:I8070
商品货号:商品品牌:规格基本售价:选择规格
I8070-1gSolarbio1g60.00元
I8070-5gSolarbio5g180.00元
I8070-100gSolarbio100g3000.00元


有效期5年
级别Ultra Pure Grade
溶解性50 mg/ml Water
别名Isopropyl-β-D-Thiogalactoside;IPTG
英文名称IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
CAS367-93-1
分子式C9H18O5S
分子量238.31
储存条件2-8℃
纯度Purity≥99.0%
外观(性状)白色粉末
单位

产品简介

    异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名称IPTG。为安慰性诱导物,X-gal为生色底物,二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α互补)。实现α互补的细菌暴露IPTG,铺在含有X-gal生色底物的培养基上,可形成蓝色菌落。外源DNA插入质粒的多克隆位点后可破坏α互补作用,将产生白色菌落。

特性:纯度 :≥99.0% (TLC) 熔点:110-114℃

湿度(%):≤1.0 pH (5%, 水)25℃:5-7

比旋光度 (1%, 水):-34.0--29.0

溶解性:IPTG贮存液,先在8ml蒸馏水中溶解2g,定溶至10ml,用0.22um滤器过滤除菌,贮存于-20℃。

蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法


细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。

使用浓度:IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。

预制板:倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。

IPTG诱导原理

首先

E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节?基因I。I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达。

其次

在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经b-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。

IPTG的优点

1.能诱导酶的合成,但又不被分解的分子,称为安慰诱导物。由于乳糖虽可诱导酶的合成,但又随之分解,产生很多复杂的动力学问题,因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。

2.IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以IPTG的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。

3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。

4.半乳糖苷键中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同,IPTG虽不为β–半乳糖苷酶所识别,但它是lac基因簇十分有效的诱导物。



异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG 相关文献

《Production, Characterization, and Epitope Mapping of Monoclonal Antibodies Against Different Subtypes of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus (RHDV)》 作者:Desheng Kong, Jiasen Liu, Qian Jiang, Zuo Yu, Xiao 期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 20857 (2016)》 影响因子:4.259 PMID:26878800

《Mutagenesis and redox partners analysis of the P450 fatty acid decarboxylase OleTJE》 作者:Bo Fang, Huifang Xu, Yi Liu, Fengxia Qi, Wei Zhang 期刊:《Scientific Reports 7, Article number: 44258 (2017)》 影响因子:4.259 PMID:28276499



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