第五代耐热逆转录酶（无甘油版）11301ES
产品名称： 第五代耐热逆转录酶（无甘油版）11301ES
英文名称： Hifair V Reverse Transcriptase
产品编号： 11301ES12
产品价格： 585.00
产品产地： 翌圣生物
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2023-12-14T09:15:24
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 3KU | 585.0 |
| 12KU | 1952.0 |
| 120 KU | 15625.0 |
| 300KU | 28652.0 |
| 3,000 KU | 229215.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640
- 传真 : 021-34615995-188
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
产品简介
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
产品信息
|
货号 |
11301ES06 / 11301ES12 / 11301ES62/ 11301ES75 /11301ES96 |
|
规格 |
3 KU / 12 KU / 120 KU / 300 KU / 3000 KU |
|
单位定义 |
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。 |
组分信息
|
组分名称 |
11301ES06 |
11301ES12 |
11301ES62 |
11301ES75 |
11301ES96 |
|
Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) |
5 μL |
20 μL |
200 μL |
500 μL |
5 mL |
储存条件
2~8℃保存，有效期6个月。
使用说明
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
|
组分 |
使用量 |
|
RNase free ddH2O |
to 13 μL |
|
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL or 1 μL or 1 μL |
|
模板RNA |
Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
|
组分 |
使用量 |
|
上一步的反应液 |
13 μL |
|
5×Hifair® V Buffer |
4 μL |
|
dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
|
Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) |
200 U |
|
RNase inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
|
RNase free ddH2O |
To 20 μL |
3. 逆转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
25℃* |
5 min |
|
42℃** |
15-30 min |
|
85℃*** |
5 min |
*当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。
***85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。
4. 本产品仅用作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20231116