黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒上海雅吉生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒
英文名称: Xanthine Oxidase Assay Kit
产品货号: YS29240
产品规格: T25
试剂级别: 细胞培养级
产品产地: 中国
产品商标: 雅吉生物
价    格: 询价元
保存与运输: 室温
现货状态: 1000瓶
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2021/1/21 10:43:00
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诚信指数:661点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒测定意义:

XOD(EC 1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时

也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的心,肺,肝脏等组织中,当肝

功能受损时,XOD 大量释放到血清中,对肝损害的诊断具有特异性的意义。

测定原理:

XOD 催化黄嘌呤产生尿酸,尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、

研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:30mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×2 瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量

(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提

取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,

加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

操作步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。

2、 XOD 检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一,充分混匀,待用;用

不完的试剂 4℃可保存一周;

3、测定前将 XOD 检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 250μL 工作液,立即混匀并计时,记录

290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。

XOD 活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)XOD 计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109

]÷V 样÷T=2131×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。

XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109

]÷(V 样×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

 单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=2131×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=4.26×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4
 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104
L/ mol /cm;d:比
色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反
应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,
500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)XOD 计算:
单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷V 样÷T=4262×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(V 样×Cpr)÷T =4262×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(W× V 样÷V 样总)÷T =4262×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10
9
]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=8.52×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2.6×10-4
 L;ε:尿酸摩尔消光系数,1.22×104
L / mol /cm;d:96
孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:
反应时间,1 min;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总
数,500 万。 

 

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