超氧阴离子清除能力测试盒上海雅吉生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 超氧阴离子清除能力测试盒
英文名称: Superoxide Anion Scavenging Activity
产品货号: YS29248
产品规格: T25
试剂级别: 细胞培养级
产品产地: 中国
产品商标: 雅吉生物
价    格: 询价元
保存与运输: 室温
现货状态: 1000瓶
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2021/1/22 12:27:00
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诚信指数:661点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海雅吉生物科技有限公司
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产品详细描述

 超氧阴离子清除能力测试盒测定意义

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基,可攻击生物大分子,如脂质、 蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等,使其交链或者断裂,引起细胞结构和功能的破坏,与机 体衰老和病变有很密切的关系,清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

测定原理 

AP-TEMED 系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成 NO2-,NO2-与对氨基***磺酸和 α- 萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在 530nm 处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除 能力与 530nm 的吸光值呈负相关。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 1mL×1 支,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加 4mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂五:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

样品处理

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL

提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500

万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,

总时间 3min);然后 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 培养液或其它液体:直接检测。

4. 粉剂药物可配制成相同浓度,比如 1mg/mL。

测定操作

空白管 对照管 测定管

试剂一(μL) 10 10 10

试剂二(μL) 40 40

H2O(μL) 65 25

充分混匀,25℃反应 1min

样品(μL) 25

试剂三(μL) 50 50 50

充分混匀,37℃反应 30min

试剂四(μL) 50 50 50

试剂五(μL) 50 50 50

充分混匀,37℃显色 20min,于微量石英比色皿/96 孔板,以空白管调零,在 530nm 处测定

对照管和测定管的吸光值,分别记为 A 对照管和 A 测定管。

注意:空白管只需测定一次。

计算公式

超氧阴离子清除率 I%= 100%

A

A - A

对照管

对照管 测定管

注意事项

1. 试剂一 4℃可保存 2 个月,配制好的试剂二 4℃可保存一周,建议实验前配制,并尽快

使用。

2. 样品处理完后立即进行测定,或者低温保存不超过 24 小时。

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