非蛋白质巯基测试盒上海雅吉生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 非蛋白质巯基测试盒
英文名称: Non protein thiol Assay kit
产品货号: YS29249
产品规格: T25
试剂级别: 细胞培养级
产品产地: 中国
产品商标: 雅吉生物
价    格: 询价元
保存与运输: 室温
现货状态: 1000瓶
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2021/1/22 13:33:00
浏览人数:25
诚信指数:661点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海雅吉生物科技有限公司
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上海市闵行区元江路5500号第1幢5658室
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电话:
15301693058
传真:
021-34661275
联系人:
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上海·上海
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产品详细描述

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
非蛋白质巯基测试盒测定意义:
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功
能,对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理:
巯基基团与 5,5’-二硫代-双-*****甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最
大吸收峰。
自备实验用品:
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 1 mL×1 管,4℃避光保存。
样品的制备:
1. 动物、植物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约
0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后加入 4mL 甲醇,室温震荡 10min,
然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500
万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,
总时间 3min)然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
3. 血清、培养液:取 0.1mL,加 0.4mL 甲醇,室温震荡 10min,然后 10000g,4℃离心 10min,
取上清置冰上待测。
操作步骤:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
2、操作表
对照管 测定管
样品(μL) 40 40
试剂一(μL) 150 150
试剂二(μL) 10
H2O(μL) 10
混匀,25℃静置,于微量石英比色皿/96 孔板,测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.7236 x,R
2 = 0.9994
1. 组织:
非蛋白质巯基含量(μmol/g)=
1.7236
DA
×V 反总÷ (V 样÷V 样总×W) ×5=14.5×ΔA÷W
2. 血清、培养液:
非蛋白质巯基巯基含量(μmol/mL)=
1.7236
DA
×V 反总÷V 样×5×103
=14500×ΔA
3. 细胞:
非蛋白质巯基含量(μmol/104)=
1.7236
DA
×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5
=14.5×ΔA÷细胞数量
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,
1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;103 :1mmol/L=103
μmol/ L
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.8618x,R
2 = 0.9994
1. 组织:
非蛋白质巯基含量(μmol/g)=
0.8618
DA
×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×5= 29×ΔA÷W

2. 血清、培养液:
非蛋白质基含量(μmol/L)=
0.8618
DA
×V 反总÷V 样×5×103
=29000×ΔA
3. 细胞:
非蛋白质巯基含量(μmol/104)=
0.8618
DA
×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5
=14.5×ΔA÷细胞数量
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样品体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,
1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;103 :1mmol/ L=103
μmol/ L
注意事项
最低检出限为 10μ mol/L。

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