注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
非蛋白质巯基测试盒测定意义：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功
能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理：
巯基基团与 5,5’-二硫代-双-**苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最
大吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。
样品的制备：
1. 动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约
0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后加入 4mL 甲醇，室温震荡 10min，
然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500
万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，
总时间 3min）然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 血清、培养液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室温震荡 10min，然后 10000g，4℃离心 10min，
取上清置冰上待测。
操作步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
2、操作表
对照管 测定管
样品（μL） 40 40
试剂一（μL） 150 150
试剂二（μL） 10
H2O（μL） 10
混匀，25℃静置，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.7236 x，R
2 = 0.9994
1. 组织：
非蛋白质巯基含量（μmol/g）=
1.7236
DA
×V 反总÷ (V 样÷V 样总×W) ×5=14.5×ΔA÷W
2. 血清、培养液：
非蛋白质巯基巯基含量（μmol/mL）=
1.7236
DA
×V 反总÷V 样×5×103
=14500×ΔA
3. 细胞：
非蛋白质巯基含量（μmol/104）=
1.7236
DA
×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5
=14.5×ΔA÷细胞数量
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，
1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1mmol/L=103
μmol/ L
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.8618x，R
2 = 0.9994
1. 组织：
非蛋白质巯基含量（μmol/g）=
0.8618
DA
×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×5= 29×ΔA÷W

2. 血清、培养液：
非蛋白质基含量（μmol/L）=
0.8618
DA
×V 反总÷V 样×5×103
=29000×ΔA
3. 细胞：
非蛋白质巯基含量（μmol/104）=
0.8618
DA
×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5
=14.5×ΔA÷细胞数量
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，
1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1mmol/ L=103
μmol/ L
注意事项
最低检出限为 10μ mol/L。